肝素鈉分析柱--南京創分儀器
肝素鈉分析柱
柱子使用:
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先不接柱子,將液相儀器(Aglient1200)系統*替換成所用流動相,然后按照色譜柱上流動相流動方向安裝柱子,開啟液相流速,以流速0.5mL/min,用初始梯度流動相平衡柱子2.0 h,進樣前將流速降到0.22 mL/min,至基線走平,進樣;
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再次進樣之前需用0.5 mL/min的流速平衡柱子0.5 h,至基線走平。
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如果用自動進樣連續進樣,可按照以下梯度平衡柱子進
柱子使用后處理:
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液相色譜儀用去離子水沖洗干凈后,用去離子水以0.5mL/min的流速沖洗柱子,至流出液以pH試紙測試呈中性(通常需沖洗兩個小時以上),將柱子卸下,堵上堵頭,放室溫存放
容易出現的幾種問題
一:基線不穩,重現性不好
解決:柱子未平衡好,充分平衡柱子
初次進樣,平衡時間通常需要以0.5 mL/min平衡2 h。可進樣前先走一針空白梯度,再回到初始梯度平衡,進樣。若柱子尚未平衡好,出峰會出現異常的情況,如保留時間不重現,基線不穩,基線漂移不重現等。
下圖為平衡正常的柱子和未平衡好的柱子走的圖譜
二:基線漂移過高
解決:不同的高氯酸鈉的導致流動相的差異
不同廠家生產的高氯酸鈉可能由于純度不同,導致基線的漂移差異很大,實驗室使用過的國藥、阿拉丁、上海凌峰的試劑,上海凌峰的試劑做出的圖譜基線較平緩。
下圖為相同條件下使用阿拉丁的和上海凌峰的高氯酸鈉的出峰情況。
三:對照品進樣出現鬼峰
解決:樣品自身降解產生的雜質峰
系統適用性實驗中發現,在對照品溶液中仍會有雜峰出現,保留時間為20 min,為對照品中肝素鈉和多硫酸軟 骨素降解產生的物質。
下圖1為同一份肝素鈉對照品溶液在不同保存環境下的出峰情況,圖2為放置時間過久的多硫酸軟骨素。
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