紫外-可見分光光度計(jì)的類型很多,但可歸納為三種類型:單光束分光光度計(jì)、雙光束分光光度計(jì)和雙波長分光光度計(jì)。
經(jīng)單色器分光后的一束平行光,輪流通過參比溶液和樣品溶掖,以進(jìn)行吸光度的測定。這種類型的分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)簡單,操作方便,維修容易,適用于常規(guī)分析。
雙光束分光光度計(jì)
經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為弧度相等的兩束光,一束通過參比池,另一束通過樣品池。光度計(jì)能自動比較兩束光的強(qiáng)度,此比值即為試樣的透射比,經(jīng)對數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來。雙光束分光光度計(jì)一般都能自動記錄吸收光譜曲線。由于兩束光同時分別通過參比池和樣品他,還能自動消除光源強(qiáng)度變化所引起的誤差。
雙波長分光光度計(jì)
雙波長分光光度計(jì)的優(yōu)點(diǎn):對于多組分混合物、混濁試樣(如生物組織液)的分析,以及存在背景于擾或共存組分吸收干擾的情況下,利用雙波長分光光度法,往往能提高方法的靈敏度和選擇性。利用雙波長分光光度計(jì),能獲得導(dǎo)數(shù)光譜。
紫外可見分光光度計(jì)基本定律
1852年,比爾(Beer)參考了布給爾(Bouguer)1729年和朗伯(Lambert)在1760年所發(fā)表的文章,提出了分光光度的基本定律,即液層厚度相等時,顏色的強(qiáng)度與呈色溶液的濃度成比例,從而奠定了分光光度法的理論基礎(chǔ),這就是**的比爾朗伯定律。1854年,杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人將此理論應(yīng)用于定量分析化學(xué)領(lǐng)域,并且設(shè)計(jì)了**臺比色計(jì)。到1918年,美國國家標(biāo)準(zhǔn)局制成了**臺紫外可見分光光度計(jì)。此后,紫外可見分光光度計(jì)經(jīng)不斷改進(jìn),又出現(xiàn)自動記錄、自動打印、數(shù)字顯示、微機(jī)控制等各種類型的儀器,使光度法的靈敏度和準(zhǔn)確度也不斷提高,其應(yīng)用范圍也不斷擴(kuò)大。
紫外可見分光光度法從問世以來,在應(yīng)用方面有了很大的發(fā)展,尤其是在相關(guān)學(xué)科發(fā)展的基礎(chǔ)上,促使分光光度計(jì)儀器的不斷創(chuàng)新,功能更加齊全,使得光度法的應(yīng)用更拓寬了范圍。
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