單細胞分離確保了分析結果的高精度
單細胞分離是一種從待分離的材料中直接分離單個細胞進行培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)的方法。該法在顯微鏡下操作,對于體積較大的微生物,可以用毛細管提取微生物個體;對較小的細胞或孢子,可以用顯微針、鉤、環(huán)等挑取以獲得單細胞;也可將適當稀釋后的樣品制成小液滴,在顯微鏡下選取只含有一個細胞的液滴培養(yǎng)。
對于較大的微生物,可采用毛細管提取單個個體,并在大量的滅菌培養(yǎng)基中轉移清洗幾次,除去較小微生物的污染,這項操作可在低倍顯微鏡,如解剖顯微鏡下進行。對于個體相對較小的微生物,單細胞分離采用顯微操作儀,在顯微鏡下進行。目前,市場上有售的顯微操作儀種類很多,一般是通過機械、空氣或油壓傳動裝置來減小手的動作幅度,在顯微鏡下用毛細管或顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個微生物細胞或孢子以獲得純培養(yǎng)。
在沒有顯微操作儀時,也可采用一些變通的方法在顯微鏡下進行單細胞分離,例如,將經適當稀釋后的樣品制備成小液滴在顯微鏡下觀察,選取只含一個細胞的液滴進行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)。單細胞分離法對操作技術有比較高的要求,限于高度專業(yè)化的科學研究中采用。
在目前的研究中,單細胞分離的手段主要是通過將細胞懸浮后做高通量篩選。其中主要使用的是流式細胞熒光分選技術或者免疫磁性細胞分選法,這兩種方法在臨床上目前均廣泛應于細胞篩選,然而這兩種方法均需要使用相當大量數(shù)量的細胞,一般在105-106數(shù)量級上。然而很多研究中,培養(yǎng)出的細胞不太容易達到這個數(shù)量級,而在少量細胞分選中,這兩種方法均面臨著挑戰(zhàn)。
微流控芯片技術的出現(xiàn)讓少量單細胞分離有了新的選擇,該方法主要通過熒光、磁力、流體動力流、聲光電泳、介電泳粘附等性質進行分離。這種方法往往需要較低的細胞濃度來實現(xiàn)單細胞分離,因此在分離過程中需要嚴格控制進入微流控芯片中的細胞量。
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