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液相色譜儀工作原理：高壓泵將貯液罐的流動相經進樣器送入色譜柱中，然后從檢測器的出口流出，這時整個系統就被流動相充滿。當欲分離樣品從進樣器進入時，流經進樣器的流動相將其帶入色譜柱中進行分離，分離后不同組分依先后順序進入檢測器，記錄儀將進入檢測器的信號記錄下來，得到液相色譜圖。
液相色譜儀法是在經典色譜法的基礎上，引用了氣相色譜的理論，在技術上，流動相改為高壓輸送，色譜柱是以殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經典液相色譜（每米塔板數可達幾萬或幾十萬），同時柱后連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續檢測。
一般在使用時注意：
1、在用紫外吸收檢測器時，所用流動相應符合紫外分光光度法項下對溶劑的要求。
2、各品種項下規定的條件除固定相種類、流動相組分、檢測器類型不得任意改變外，其余如色譜柱內徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組分的比例、柱溫、進樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當改變。
3、一般色譜圖約于20分鐘內記錄完畢，以適應具體品種并達到系統適用性試驗的要求。
4、如所用流動相為含鹽流動相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇沖洗。
5、不要在高溫下長時間使用硅膠鍵合相色譜柱。
6、流動相應選用色譜試劑、高水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經過濾后使用，過濾時注意區分水系膜和油系膜的使用范圍。
7、水相流動相需經常更換（一般不超過2天），防止長菌變質。
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