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牛核因子κB(NF-κB)ELISA檢測試劑盒需要注意的細節(jié)問題

來源:上海臻科生物科技有限公司   2019年09月06日 17:37  

牛核因子κBNF-κBELISA檢測試劑盒需要注意的細節(jié)問題有哪些?

首先需要注意樣本處理細節(jié),下面是各種樣本具體處理時的細節(jié)。

1.  血清將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存,但應避免反復凍融。
2.  血漿用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存,但應避免反復凍融。
3.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

4.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

注:標本溶血會影響后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

 

 

牛核因子κB(NF-κB)ELISA檢測試劑盒在操作的時候還有哪些需要注意的地方呢?

  • 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
  • 洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
  • 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
  • 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
  • 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
  • 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
  • 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
  • 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
  • 不能使用過期產(chǎn)品。
  • 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置

 

11.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

 

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