GIBICO DMEM ,10% 胎牛血清,很好養,長的很快,細胞形態:在密度低的時候,是多邊形,密度大的時候,偏向于梭形。
1. 細胞核材料:冷藏保存的人肝細胞(M/F0095-P),InViteoGro CP 培養基(Z990003),和InViteoGro HI培養基(Z990012)從試管內技術(Baltimore,MD)獲得。
C2-神經酰胺、C2-二氫神經酰胺和C6-神經酰胺是從Alabaster,AL獲得的。抗HuR抗體是從Santa Cruz,CA 獲得的,β肌動蛋白是從Cambridge,MA買來的。
HRP共軛的抗兔和鼠的IgM來自Hercules,CA。ECL Western blot 探測箱來自GE 醫療保健(Salt Lake City,UT)。FuGENE6轉染試劑來自Roche(Indianapolis,IN),Maxiprep盒來自Qiagen(Santa Clarita,CA)。
Pan-caspase 抑制器Zvad-fmk和Caspase抑制器設備分別購買于Axxora(San Diego ,CA)和Calbiochern(La Jolla,CA)。Caspase5分析儀來自Calbiochern,caspase5cDNA來自OriGene(Rockville,MD)。
2.用低氧處理肝細胞:冷藏的人肝細胞移出和溶解在InVitroGro CP培養基中。細胞在CP培養基稀釋到濃度為0.7×106cells/ml。
肝細胞像膠原一樣涂抹在玻片上,然后放置在37℃、5%CO2的培養器里。經過了一夜的培養,肝細胞轉移到InVitroGro HI 培養基中。
肝細胞在HI培養基中培養一夜后,玻片放置在一個缺氧的容器(Billups-Rothenberg)里,充滿了95%的氮氣和5%的二氧化碳,在37℃培養12-72和小時。
氧氣的濃度用YSI模型55CE溶解的氧探針(YSI,Marion,MA)測量。用于這些研究中,缺氧的條件是氧氣的濃度在0.09±0.001mg/l。
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