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我們不再是我們,我們依然是我們——當Alpha®遇上CETSA®

來源:珀金埃爾默企業管理(上海)有限公司   2019年07月25日 15:55  

小分子藥物研發中,篩選能有效結合目標蛋白的分子是非常耗時耗(財)力的一個環節,但又是必須進行的工作。高失敗率源于結合情況的錯綜復雜,體外生化實驗的結合效果,往往不能很好的在細胞水平進行重現。這其中可能是因為分子在穿越細胞膜時,出現了被修飾;也可能是因為純化蛋白和真實細胞環境的蛋白構象不同。例如,在生化水平顯示很好結合效果的分子,在細胞水平可能結合的是另一個蛋白。是不是很崩潰……

 

試想,如果有一個高通量解決方案讓你可以直接在細胞水平進行小分子結合相應靶向蛋白的驗證,開不開心,意不意外?

這個方案就是Alpha®-CETSA®

什么是CETSA®

CETSA®是細胞熱遷移實驗(Cellular Thermal Shift Assay)的簡稱,是PELAGO公司2012年在歐洲注冊的技術。該技術基于的原理是:每種蛋白質都有自身的熱熔曲線(如下圖)。隨著溫度的升高,蛋白質會發生降解(藍色曲線);當蛋白質結合小分子以后,該復合蛋白的熱熔曲線會右移(紅色虛線),即相同溫度下,未降解蛋白的量會提高。CETSA®實驗的樣品來源十分靈活,可以是細胞,也可以是活體給藥以后的組織樣本。

 

傳統的CETSA®對于天然構象蛋白的檢測模式主要有Western-Blot和MS方法,這兩種方法都無法實現高通量的篩選。2019年7月,PELAGO公司正式和PerkinElmer公司達成戰略合作協議,推出高通量,高靈敏度的CETSA®HT檢測方案,即Alpha®-CETSA®

 

Alpha®-CETSA®的操作

1.樣品和化合物進行孵育。

2.進行熱休克操作(建議在PCR儀上進行該操作)。

3.加入合適的裂解液。

4.加入Alpha® CETSA®檢測試劑。

5.在具有Alpha®功能的酶標儀上檢測。

 

新酶標儀加載Alpha®功能

PerkinElmer公司的Victor NIVO新款酶標儀加載了Alpha®功能,這是目前可以開展Alpha®CETSA®檢測細胞水平蛋白-分子相互作用的小的儀器。

 

目前,PerkinElmer和PELAGO一起推出的蛋白靶點試劑盒有Akt1,BCL-2,EGFR,MEK1和p38 MAKP,工具微珠2套,方便客戶靈活使用這項技術。更多的商品化試劑盒也會陸續推出。

 

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