科研和臨床檢驗場所PCR分子實驗使用頻率較高,PCR實驗怕出問題了,當PCR出現假陽性的時候,我們常常會考慮是不是引物、試劑、Mix、模板、水等發生了污染,然后逐一排查,有時還是找不到原因,耗時耗力。
這些試劑和儀器到底為什么會被污染了呢?
其實是核酸氣溶膠污染。PCR技術的高擴增效率產生的核酸氣溶膠污染,會導致檢測結果的假陽性。樣本和擴增產物經常出現多批次相同的情況,核酸氣溶膠污染在實驗區域內不斷累積,日積月累從而導致污染風險不斷增加,假陽性的發生頻率也越來越高。
氣溶膠是由固體或液體小質點分散并懸浮在氣體介質中形成的膠體分散體系,在氣體與液體面摩擦時,比如在操作時比較劇烈地搖動反應管,離心機離心,擴增后PCR產物開蓋時、吸樣時及移液器槍反復吹吸樣品都可形成氣溶膠而污染。
核酸氣溶膠與PCR過程相伴相生,污染來的悄無聲息,防不勝防,假陽性結果讓無數生物學子奔潰與抓狂,那我們究竟該如何應對?
本圖文解析如下PCR實驗室污染控制策略以供參考!!
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