細(xì)胞系使用說明書
細(xì)胞名稱 | SK-BR-3 人乳腺癌細(xì)胞 |
貨號 | H099 |
種屬 | 人 |
細(xì)胞來源 | ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn) |
生長特性 | 貼壁 上皮細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)條件 | 培養(yǎng)基:DMEM90%+ FBS 10%(推薦HAKATA優(yōu)等胎牛血清,貨號:HN-FBS-50) 溫度:37℃ 氣相:95%空氣,5% CO2 |
傳代 | 1. 用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將舊培養(yǎng)基更換成5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液或傳代,每2至3天加入新鮮培養(yǎng)基(根據(jù)細(xì)胞密度); 2. 通過添加新鮮培養(yǎng)基來維持培養(yǎng)。或者可以通過離心去除舊培養(yǎng)基,再加入新培養(yǎng)基并以5-10×105個活細(xì)胞/mL的密度再懸浮進(jìn)行培養(yǎng)。建議將細(xì)胞密度維持在5×105個至1×106個細(xì)胞/mL之間。
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保存 | 凍存條件:70%*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO (備注:建議使用本公司的冷凍液(H-W-100),用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞,不能預(yù)熱后使用。) 保存條件:液氮存儲 |
供應(yīng)限制 | 僅供研究之用 |
常見問題及解決方案 | 1.培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:細(xì)胞極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。 2.收到細(xì)胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,請?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加 10%的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間長不宜超過 72 小時) 3.細(xì)胞漂浮:培養(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時后觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,表明細(xì)胞活力正常,剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉,留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細(xì)胞生長至匯合度80%,進(jìn)行消化傳代;如細(xì)胞還是不貼壁,將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo),直到問題解決。 |
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