手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
細胞生長不良的常見原因及解決方法
| 問題/原因 | 解決方案 |
|---|---|
| 從庫存中解凍后沒有或幾乎沒有活細胞 | |
| 細胞狀態(tài)很差 | 確保培養(yǎng)物已被正確鑒定，并且是健康的，沒有微生物污染，并且在生長的對數(shù)期后期（80-90％匯合）。 輕輕收獲細胞以防止損壞。 |
| 細胞凍存不正確 | 在液氮中凍存時，確保細胞，培養(yǎng)基和其他試劑 的濃度-以及冷凍方案-遵循供應商的建議。通常，細胞凍存應該以每分鐘約1至3℃的速度緩慢進行，以使冰晶形成小化。 使用電子可編程或機械冷凍裝置，以確保一致和適當?shù)睦鋬鏊俣取榧毎x擇合適的細胞凍存液。如果使用甘油，請不要將其存放在光線下，因為光照會將甘油轉(zhuǎn)化為細胞毒性。 |
| 細胞凍存不正確 | 凍存應始終保持在-130°C以下的溫度，盡可能是在液氮中，以確保大的生存能力。在液氮上方的氣相中儲存優(yōu)選儲存在液體本身中，因為如果液氮泄漏到冷凍管中，則在解凍期間存在小瓶爆炸的風險。 |
| 細胞復蘇不正確 | 復蘇細胞時，請遵循供應商推薦的方案。通常，細胞應快速解凍。使用預熱的媒體。 盡快去除含有細胞凍存液的培養(yǎng)基，以防止活力降低。 確保小心處理細胞。不要高速渦旋或離心，因為細胞在冷凍保存后特別容易受損。 |
| 從庫存或傳代解凍后細胞貼壁不良 | |
| 塑料容器上靜電積聚（濕度低時尤其有問題） | 增加室內(nèi)濕度。 用（消毒的）濕毛巾擦拭培養(yǎng)皿外。 使用防靜電裝置。 |
| 細胞，培養(yǎng)基和/或其他試劑的混合不充分 | 確保細胞和所有試劑的溶液充分混合。 |
| 滾瓶的旋轉(zhuǎn)速度太快 | 以較慢的速度旋轉(zhuǎn)瓶子。 |
| 細胞生長緩慢 | |
| 細胞傳代次數(shù)過多 | 獲得已經(jīng)傳代培養(yǎng)較少次數(shù)的新細胞。 |
| 收獲時細胞太融合 | 從新的細胞儲備開始，在生長的對數(shù)期收獲，然后達到100％匯合。 |
| 培養(yǎng)基，血清，緩沖液等質(zhì)量差或配方不正確 | 丟棄當前試劑并使用新批次。 |
 CO 2電平不匹配是什么媒體的碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)需要被使用，從而導致控制pH值不足 | 確保培養(yǎng)箱CO 2 水平與緩沖系統(tǒng)所需的水平相匹配。通常，緩沖液中碳酸氫鹽的濃度越高 ，培養(yǎng)箱氣體混合物中所需的CO 2濃度越高。 |
| 微生物（尤其是支原體）污染 | 有關 預防和消除微生物污染的詳細實踐，請參閱 污染問題。 |
| 將培養(yǎng)物暴露于熒光下會使光敏介質(zhì)成分（核黃素，色氨酸和HEPES）轉(zhuǎn)化為細胞毒性自由基和H 2 O 2 | 將細胞和培養(yǎng)基存放在黑暗中，遠離熒光燈。 |
| 不準確的細胞計數(shù)方法導致假定的細胞生長不良 | 確保計數(shù)樣品充分混合，以避免細胞密度的局部變化，從而影響細胞計數(shù)的準確性。 使用血細胞計數(shù)器的手動方法重新檢查用于確定計數(shù)的所有計算，或考慮自動細胞計數(shù)。 |
| 細胞生長不均勻 | |
| 容器內(nèi)不均勻的細胞生長表明細胞和/或培養(yǎng)基的混合不充分 | 確保通過溫和的渦旋或移液將細胞混合物和所有試劑適當混合，以避免局部濃度變化。 |
| 在同一時間生長的可能相同的血管之間的不均勻細胞生長可能是由于培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度變化 | 盡可能避免將培養(yǎng)皿堆疊在一起，因為底部的容器靠近金屬架，并且可以快地加熱。 當儲存在孵化器前部的容器比后部儲存的容器生長較少時，請注意盡可能保持孵化器門關閉，并將容器向后移動。 |
| 具體增長模式： | |
| 培養(yǎng)箱中蒸發(fā)不均勻?qū)е屡囵B(yǎng)基體積減少和多孔板外孔生長不良 | 保持水庫充分加濕CO 2和其他傳入的氣體。如有必要，在孵化器中創(chuàng)建一個蒸發(fā)“熱點”的地圖，以避免在隨后的實驗中。 |
| 孵化器振動導致同心環(huán)（在餐具中），平行條或不規(guī)則圖案（在燒瓶中） | 將孵化器放置在堅固的表面上，而不與低流量區(qū)域的其他設備共用。盡可能遠離其他電動設備。 |
| 由于架子的金屬比周圍區(qū)域提供更多的熱量，因此稍微過高或稍微過低的培養(yǎng)箱溫度會分別導致點狀或交叉影線的圖案。細胞密度較高的點表明不與金屬接觸的細胞生長更好; 交叉影線表明細胞更喜歡溫暖的區(qū)域而不是金屬。 |  根據(jù)需要調(diào)整培養(yǎng)箱溫度，注意盡量減少培養(yǎng)箱打開的時間，從而導致熱量損失。裝有介質(zhì)的假容器也可用于隔離與貨架的接觸。 |
| 非水平的培養(yǎng)箱架可導致不均勻的細胞密度 | 在使用之前，以及在孵化器清潔和維修之后使用水平擱板。 |
| 培養(yǎng)基中存在氣泡導致清晰的條帶（在滾瓶中），沒有細胞生長的斑點（在燒瓶和餐具中） | 小心地倒入或移取介質(zhì)以避免氣泡。 |
| 冷凝導致垂直條紋（在滾瓶和燒瓶中） | 不要讓容器暴露在培養(yǎng)箱外的較冷溫度超過必要時間。使用前立即從培養(yǎng)箱中取出容器。 |
| 太小的介質(zhì)體積沿著餐具和燒瓶的側(cè)壁產(chǎn)生增加的細胞密度環(huán)。這是由于彎月面的曲線在燒瓶或井的中心形成了介質(zhì)貧乏區(qū)域。 | 向培養(yǎng)皿中加入足量的培養(yǎng)基。一般準則是每cm 2生長區(qū)域0.2-0.3mL培養(yǎng)基 |
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的，應在授權范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關權利。
采購中心