細(xì)胞凍存液比例:
凍存液配制:
20%胎牛血清、10%DMSO、70%1640培養(yǎng)液;或90%血清、10%DMSO,更可防止細(xì)胞內(nèi)冰晶形成。
DMSO在4℃時(shí)對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性,分子量小、溶解度大、易透過(guò)細(xì)胞膜,降低細(xì)胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度,使細(xì)胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過(guò)分外滲,避免了細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮;DMSO與水分子結(jié)合,可使冰點(diǎn)下降,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少冰晶損傷.
FBS:DMSO 不是必須9:1, 這種方式太了,F(xiàn)BS很貴,且一般務(wù)必要,除非是貴重的淋巴細(xì)胞等。 一般用*培養(yǎng)基(含10-20%FBS)與DMSO按一定比例凍存,例如9:1 或95:5凍存,有一定偏差也是可以的。
另外,還有一些是無(wú)血清培養(yǎng)的細(xì)胞,也不能添加血清,這時(shí)就用無(wú)血清培養(yǎng)基(根據(jù)細(xì)胞特性定制的培養(yǎng)基)加入5-10%的DMSO來(lái)凍存。
總之,不是必須FBS:DMSO=9:1, 那是很古老的文獻(xiàn)資料里常提到的凍存方案。
細(xì)胞類(lèi)型和細(xì)胞株個(gè)體特性。不同細(xì)胞有其凍存條件,不盡相同,需參考說(shuō)明書(shū)和文獻(xiàn)。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凍存后狀態(tài)不佳,需要自己摸條件,或考慮污染和培養(yǎng)條件問(wèn)題。
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