細胞的復蘇與凍存
細胞復蘇:指將凍存的細胞解凍之后重新培養,細胞恢復生長的過程。
復蘇過程如下圖所示:
常見問題解答:
Q:為什么細胞復蘇后,很多難以貼壁?
A:忽略培養基的問題,主要考慮細胞凍存時狀態差或者復蘇時動作太慢導致細胞死亡。切記重要的融化速度要快,可不時搖動冷凍管,使之盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。
Q:為什么細胞貼壁了,卻長不起來?
A:此時需要考慮的是細胞密度問題,一些細胞傾向于維持一定的密度,若復蘇的細胞生長緩慢,可將細胞轉移到較小的培養瓶/皿中培養。
細胞凍存:將細胞放在低溫環境(-70℃~-196℃),細胞內的代謝降低,可大限度的保存細胞活力,以便長期儲存。
常見問題解答:
Q:目前細胞凍存液多采用的什么配方?
A:目前細胞凍存液的配方有很多種,如培養基:血清:DMSO=7:2:1或8:1:1或5:4:1,或直接用血清:DMSO=9:1。 這里小秋推薦使用HAKATA無血清細胞凍存液,無需程序降溫,細胞存活率和活力高達90%-98%,適用于干細胞凍存及無血清培養細胞。
Q:若沒有細胞凍存盒,我們該怎么辦?
A:可先將凍存管放入4℃冰箱中10min,再移至-20℃冰箱30min,-80℃冰箱2h或過夜,后放入液氮罐內。為了節約時間,還可直接在凍存盒外包裹一團棉花,用棉花代替凍存盒緩慢降溫的特點,將細胞轉移至-80℃冰箱過夜,再轉移至液氮保存。
Q:細胞凍存時對細胞量有要求嗎?
A:細胞復蘇時會有一定的細胞死亡,因此細胞的濃度應足夠高,起始濃度106—107個/ml/管;
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