細(xì)胞外泌體/微囊泡介紹中文版，外泌體是細(xì)胞分泌的納米囊泡（EV），其直徑大小為30-150nm之間，具有閉合的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)。 它幾乎存在于所有體液中，并在其表面以及胞內(nèi)中攜帶各種分子（蛋白質(zhì)，脂質(zhì)和RNA等物質(zhì)外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞因子、生長因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì)，在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗腫瘤免疫等生理過程，與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān),由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo)，另一方面也可以作為治療手段，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治療.

近年來，研究成果表明，外泌體循環(huán)微粒是促成心血管炎癥、堵塞與損傷的因素，而過往由于常規(guī)設(shè)備在微小顆粒檢測上的局限性，使循環(huán)微粒這一重要因素在過去往往被排出在病因分析之列。Apogee納米級超高分辨率流式細(xì)胞儀，*的100納米散射光分辨率及10nm的靈敏度，突破外泌體與微囊泡研究瓶頸，前沿科學(xué)研究大爆炸！

外泌體檢測

常規(guī)流式細(xì)胞儀小檢測細(xì)胞直徑200-500nm細(xì)胞，而檢測100-200nm或更小的顆粒時(shí)是無法實(shí)現(xiàn)。尤其在檢測細(xì)胞外囊泡、外泌體、微顆粒微小顆粒常規(guī)流式更是難以檢測到，本文章通過Apogee A50-Micro 超納米級流式細(xì)胞儀檢乳腺癌與健康人血液內(nèi)外泌體免疫標(biāo)記抗體表達(dá)量、培養(yǎng)細(xì)胞與血清內(nèi)外泌體進(jìn)行對比。證實(shí)此款流式是目前檢測外囊泡的*能夠?qū)崿F(xiàn)100納米級以內(nèi)靈敏度的流式細(xì)胞儀。

通常情況下提取外泌體、微囊泡均為分離純化方法。如超速離心、免疫磁珠、超濾、沉淀或試劑盒等方法

圖A：通過差異離心速率獲得乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和人血清中外泌體蛋白。 耗時(shí)3小時(shí)

圖B：通過使用試劑盒方法獲得外泌體分離，

圖C：通過NTA觀察，外泌體的平均大小為89±33nm，表面電荷為約30mV，

圖D E F：通過免疫印跡和免疫熒光染色方法分析CD63，CD81和LAMP2B存在，血清中分離外泌體Grp94的不表達(dá)情況。

實(shí)驗(yàn)證明：傳統(tǒng)方法只能獲得廣泛性、某一類別的外泌體、囊泡及雜質(zhì)物質(zhì)，無法針對性、性獲得到實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡鞍祝|(zhì)等。

培養(yǎng)細(xì)胞

圖A：Apogee A50- Micro*光散射器， 小角度光散射（SALS），中角光散射（MALS）和大角度光散射（LALS）檢測細(xì)胞內(nèi)部顆粒，
圖D，E  F：Apogee Mix *微珠微珠作為內(nèi)參，設(shè)置閾值。
圖G：設(shè)置樣本空白、同型對照可以觀察到MDA-MW-231 MCF-12A細(xì)胞外泌體樣本的、anti-CD44抗體表達(dá)情況。
圖H: 應(yīng)用免疫印跡MDA-MW-231 與MCF-12A細(xì)胞對比CD44抗體，β-actin做內(nèi)參。

實(shí)驗(yàn)證明： 超納米級流式比免疫印跡方法學(xué)更、尤其對熒光較弱不會導(dǎo)致不可信數(shù)據(jù)。

乳腺癌監(jiān)測

應(yīng)用流式細(xì)胞儀與CD47 -ELISA方法學(xué)對比乳腺癌患者與健康人群中監(jiān)測CD47表達(dá)量的動態(tài)變化， 可以監(jiān)測巨噬細(xì)胞摧毀癌細(xì)胞的能力。

A、C 圖：顯示健康人對照（A）乳腺癌患者（C）血液標(biāo)本通過MALS 和LALS 散射光信號讀取的散點(diǎn)圖。
B、D圖： 顯示兩組樣本外泌體CD47表達(dá)異常，乳腺癌組CD47明顯表達(dá)減少，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P值=0.004說明巨噬細(xì)胞啟動吞噬效力。
E圖：在B、D圖個(gè)選取N=60人份血液標(biāo)本。 未配對t檢驗(yàn)，P值<0.05.
F圖：通過ELISA 測量健康人N=40人份，乳腺癌N=50份，CD47表達(dá)量，未配對t 檢驗(yàn)，P值<0.01.

實(shí)驗(yàn)證明：超納米級流式無法匹敵的散射光和分辨率可以檢測不同細(xì)胞領(lǐng)域，通過健康人與乳腺癌患者CD47抗體表達(dá)量的不同，可以判定癌癥療效和預(yù)后指標(biāo)。

參