上海銘博生物實驗室介紹：細胞共培養(yǎng)實驗

1.基本原理

體外細胞共培養(yǎng)（co-culture)是將兩種細胞（可以來自同一種組織，也可以來自不同的組織）混合共同培養(yǎng)，從而使其中一種細胞的形態(tài)和功能穩(wěn)定表達，并維持較長時間。該技術(shù)能模擬體內(nèi)生成的微環(huán)境，便于更好地觀察細胞與細胞、細胞與培養(yǎng)環(huán)境之間的相互作用以及探討藥物的作用機制和可能作用的靶點，*單層細胞培養(yǎng)和整體動物實驗的鴻溝。
目前主要有三方面的研究內(nèi)容：分別是a. 細胞與細胞之間的接觸、作用，引起胞質(zhì)膜的直接接觸并產(chǎn)生細胞外基質(zhì) ECM ，其含有間質(zhì)膠原、纖連蛋白、蛋白多糖及層粘連蛋白等成分，從而模擬了與體內(nèi)相似的微環(huán)境，維持細胞的立體構(gòu)形及促進細胞的功能。b.細胞與細胞之間的相互作用 ,觀察細胞共培養(yǎng)后其功能、性狀和生長行為的變化 ,如某一細胞的分泌物對另外一種細胞基因表達的影響，細胞與細胞之間的“對話”等。c.研究藥物對細胞形態(tài)、功能的影響以及相關(guān)機制，為新藥研發(fā)提供重要技術(shù)支持。
細胞共培養(yǎng)分為直接接觸式共培養(yǎng)和非直接接觸式共培養(yǎng)。直接接觸式共培養(yǎng)是指在合適的條件下，將兩種細胞按照一定比例在同一培養(yǎng)皿中共同培養(yǎng)。利用兩種細胞或組織接觸，通過旁分泌、自分泌分泌細胞因子或直接接觸等相互作用方式，主要缺點是兩種細胞分離較困難，不便于觀察和后續(xù)檢測；非直接接觸式共培養(yǎng)是指在共培養(yǎng)體系中一者對另者的影響是通過旁分泌的細胞因子相互作用，但兩者不接觸。由于兩種細胞容易分離，便于觀察和不影響后續(xù)的檢測，包括以下4種方法：（1）用一種細胞的培養(yǎng)上清液（含有不同生長因子）與另外一種細胞共培養(yǎng)。（2）將玻片上（經(jīng)過1型膠原凝膠預(yù)處理）培養(yǎng)的細胞B，以一定的比例放入細胞A的培養(yǎng)皿中與其共培養(yǎng)。（3）Millicell插入式細胞培養(yǎng)皿（Transwell小室）是一類有通透性的杯狀裝置，杯子底層放一張有通透性的膜，一般常用的是聚碳酸酯膜，孔徑大小有 0.1～12.0um。將 Transwell 小室放入培養(yǎng)板中，細胞A種在上室內(nèi)，下層種植的細胞B 其培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細胞，從而可以研究細胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細胞 A 的影響。（4）三維細胞培養(yǎng)(three dimensional cell culture,TDCC)：TDCC是將具有三維結(jié)構(gòu)不同材料的載體與各種不同種類的細胞在體外共同培養(yǎng)，使得細胞能夠分化產(chǎn)生一定的三維組織特異性結(jié)構(gòu)，構(gòu)成三維細胞載體復合物,如現(xiàn)在常用的基質(zhì)膠 (matrigel)，是一種從小鼠腫瘤組織中提取的物質(zhì)，在室溫下，它形成類似于體內(nèi)的細胞外基底膜的膠狀結(jié)構(gòu)，把內(nèi)皮細胞培Matrigel膠內(nèi)，內(nèi)皮細胞表現(xiàn)出新生血管的特征。Matrigel膠方法的局限性是并不能很好模仿體內(nèi)腫瘤和血管內(nèi)皮的微環(huán)境，細胞分離及提取困難，而且細胞因子的彌散受到一定的影響。

Ibidi共培養(yǎng)實驗產(chǎn)品介紹----µ-Slide 2孔共培養(yǎng)
2.應(yīng)用范圍：（1）不同細胞系或原代細胞的共培養(yǎng)
（2）上皮-間質(zhì)細胞互相作用
（3）體外不同種類細胞旁分泌互相作用
（4）基質(zhì)膠中細胞或細胞球體培養(yǎng)
3. 特點：
（1）IBIDI有2孔共培養(yǎng)載玻片，細胞互不接觸，但共享同一個液體環(huán)境，可以實時觀察細胞，不像transwell做共培養(yǎng)，需要取出細胞才能觀察；
（2）IBIDI共培養(yǎng)載玻片在孔里加液換液，培養(yǎng)和觀察等操作方便，比transwell的操作要簡單；
（3）此產(chǎn)品能按實驗需要調(diào)節(jié)供體細胞和受體細胞的比例；
（4）產(chǎn)品用法簡介：在淺的孔中種細胞，細胞貼壁后，加入培養(yǎng)基浸過所有的淺孔，共培養(yǎng)實驗開始；
－（如果實驗是做少量細胞的共培養(yǎng)，或多細胞對少細胞的共培養(yǎng)）IBIDI這些2孔插件，還有4孔插件都可以做，把少細胞種在插件的孔里；

4. 實驗流程簡介
1. 將40-60ul的受體細胞懸浮液種到slide中間小室，根據(jù)你的細胞類型密度控制在5-10×104cells/ml；
2. 將40-60ul的飼養(yǎng)層細胞懸浮液種到slide的其他8個小室；
3. 細胞貼壁后，移去各小室培養(yǎng)基，并洗脫掉未貼壁細胞，再加400-600ul培養(yǎng)基到大well，兩種細胞共享同一培養(yǎng)體系。


縱切面：