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萊克多巴胺檢測(cè)試劑盒原理及樣本前處理

來(lái)源:上海臻科生物科技有限公司   2019年05月05日 16:23  

萊克多巴胺檢測(cè)試劑盒原理及樣本前處理

 1. 原理

萊克多巴胺檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)尿樣、組織、飼料等樣本中的萊克多巴胺(Ractopamine,RAC),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的萊克多巴胺和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗萊克多巴胺抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含萊克多巴胺含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中萊克多巴胺的殘留量。

 

2.樣本前處理

2.1 樣本處理前須知:

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2.2 配液:

配液1:復(fù)溶液

    將10×復(fù)溶液用去離子水10倍稀釋,用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。

2.3 樣本前處理步驟:

2.3.1 尿樣處理方法:

    直接取20µl清亮尿樣進(jìn)行測(cè)定(渾濁尿樣需要過(guò)濾或經(jīng)4000r/min離心5min,以得到清亮尿樣),暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。

尿樣本稀釋倍數(shù):1    檢測(cè)下限:0.1ppb

2.3.2 組織樣本處理方法一:

   稱取均質(zhì)后的組織樣本2±0.05g ,加入6ml復(fù)溶液,充分振蕩2min,室溫4000r/min以上離心10min (若組織樣本中油脂含量較高,可在振蕩后放入85℃水浴10min后再離心)。取20µl上清液進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù):4    檢測(cè)下限:0.4ppb

2.3.3 組織樣本(肌肉和肝臟處理方法二:

1)稱取均質(zhì)后的組織樣本2±0.05g ,加入8ml乙腈溶液,充分振蕩2min,室溫4000r/min以上離心10min。

2)取上清液5ml,在56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵?干燥;

▲肌肉樣本:

    加入1ml 復(fù)溶液混合振蕩30s,取20µl用于分析。

肌肉樣本稀釋倍數(shù):1    檢測(cè)下限:0.1ppb

▲肝臟樣本:

    加入2ml正己烷振蕩溶解,再加入1ml 去離子水混合振蕩30s,室溫4000r/min以上離心5min,去除上層;取50µl下層與50µl復(fù)溶液混勻;取20µl用于分析。

肝樣本稀釋倍數(shù):2    檢測(cè)下限:0.2ppb

2.3.4 飼料樣本處理方法:

1)稱取均質(zhì)后的飼料樣品1.0±0.05g,加入10ml甲醇,再加入5g無(wú)水硫酸鈉,振蕩2min;室溫 4000r/min以上離心10min;

2)吸出離心后的上清液1ml,于56℃氮?dú)獯蹈桑? ml復(fù)溶

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