等溫滴定量熱法(Isothermal Titration Calorimetry, ITC)是近年來發(fā)展起來的一種研究生物熱力學(xué)與生物動(dòng)力學(xué)的重要方法,它通過高靈敏度、高自動(dòng)化的微量量熱儀連續(xù)、準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)和記錄一個(gè)變化過程的量熱曲線,原位、在線和無損傷地同時(shí)提供熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)信息。
微量熱法具有許多*之處。它對(duì)被研究體系的溶劑性質(zhì)、光譜性質(zhì)和電學(xué)性質(zhì)等沒有任何限制條件,即具有非特異性的*優(yōu)勢(shì),樣品用量小,方法靈敏度和度高(本儀器小可檢測(cè)熱功率2 nW,小可檢測(cè)熱效應(yīng)0.125uJ,生物樣品小用量0.4ug,溫度范圍2 ℃ - 80 ℃,滴定池體積(1.43 ml)。實(shí)驗(yàn)時(shí)間較短(典型的ITC實(shí)驗(yàn)只需30-60分鐘,并加上幾分鐘的響應(yīng)時(shí)間),操作簡(jiǎn)單(整個(gè)實(shí)驗(yàn)由計(jì)算機(jī)控制,使用者只需輸入實(shí)驗(yàn)的參數(shù),如溫度、注射次數(shù)、注射量等,計(jì)算機(jī)就可以完成整個(gè)實(shí)驗(yàn),再由Origin軟件分析ITC得到的數(shù)據(jù))。測(cè)量時(shí)不需要制成透明清澈的溶液, 而且量熱實(shí)驗(yàn)完畢的樣品未遭破壞,還可以進(jìn)行后續(xù)生化分析。盡管微量熱法缺乏特異性但由于生物體系本身具有特異性,因此這種非特異性方法有時(shí)可以得到用特異方法得不到的結(jié)果,這有助于發(fā)現(xiàn)新現(xiàn)象和新規(guī)律,特別適應(yīng)于研究生物體系中的各種特異過程。
獲得生物分子相互作用的完整熱力學(xué)參數(shù),包括結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)、摩爾結(jié)合焓、摩爾結(jié)合熵、摩爾恒壓熱容,和動(dòng)力學(xué)參數(shù)(如酶活力、酶促反應(yīng)米氏常數(shù)和酶轉(zhuǎn)換數(shù))。
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