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Namocell單細胞分離儀應(yīng)用---單細胞測序

來源:Bio-Techne   2019年03月02日 10:00  

201811月,NamocellCZ-BiohubChan Zuckerburg Biohub)合作,在單細胞測序領(lǐng)域做出了新的嘗試。CZ-Biohub利用Namocell單細胞分離儀分選出目的B細胞,并且將其進行單細胞測序,為抗體新藥的發(fā)現(xiàn)邁出了重要一步。

單細胞RNA測序(scRNA-seq)作為一種全基因組測序的方式,在單細胞層面廣泛用于確定細胞類型和細胞變異的鑒定。Namocell單細胞分離儀可以通過細胞標記CD27以及一種細胞活性的染料,來分選出單個活的B細胞。通過分析分離后的單細胞基因表達情況,對比靜息記憶B細胞,可以從單細胞層面研究基因表達差異。

圖一,人的未成熟記憶B細胞在mCD40L-3T3中批量刺激培養(yǎng)6天。收集細胞并用CD27-PECellTracker Green進行細胞染色。通過Namocell單細胞分離儀篩選PE/FITC雙陽性的細胞,單細胞分選至96PCR板,分選前PCR板中已預(yù)先鋪好4ul/孔的裂解液。通過cDNA合成情況得出單細胞分選的比例為97%。接下來進行VHVL抗體可變區(qū)域(An=8)的特異性基因的擴增或者全轉(zhuǎn)錄組文庫制備;通過二代測序獲取序列,參照靜息記憶B細胞BCR抗體表達資料組進行對比分析(B);B細胞激活基因的差異(C);   整體基因升降規(guī)律(D)。每孔只有一組BCR轉(zhuǎn)錄物,以及通過Sanger測序確定的VHVL質(zhì)量,都充分說明了分入PCR管中的只有一個細胞。

上述實驗數(shù)據(jù)確定了分選出來的單細胞的效率,同時也驗證了通過實驗前期處理和設(shè)門標準得到的確定是激活的B細胞。更重要的是,來自分選后的單細胞的cDNA適用于后續(xù)的單細胞轉(zhuǎn)錄組文庫制備和免疫球蛋白輕重鏈可變區(qū)域的全長PCRNamocell單細胞分離儀提供了一種全新的桌面式單細胞分選平臺,并且可以與下游單細胞測序分析無縫對接。

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