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凝膠色譜柱主要用于相對分子質量分布測試
凝膠色譜技術是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術,由于設備簡單、操作方便,不需要有機溶劑,對高分子物質有很高的分離效果。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。凝膠色譜柱主要用于高聚物的相對分子質量分級分析以及相對分子質量分布測試。目前已經被生物化學、分子生物學、生物工程學、分子免疫學以及醫學等有關領域廣泛采用,不但應用于科學實驗研究,而且已經大規模地用于工業生產。
根據分離的對象是水溶性的化合物還是有機溶劑可溶物,凝膠色譜柱又可分為凝膠過濾色譜(GFC)和凝膠滲透色譜(GPC)。凝膠過濾色譜一般用于分離水溶性的大分子,凝膠過濾色譜柱如多糖類化合物。凝膠的代表是葡萄糖系列,洗脫溶劑主要是水。凝膠滲透色譜法主要用于有機溶劑中可溶的高聚物相對分子質量分布分析及分離,常用的凝膠為交聯聚苯乙烯凝膠,洗脫溶劑等有機溶劑。
凝膠色譜柱不但可以用于分離測定高聚物的相對分子質量和相對分子質量分布,同時根據所用凝膠填料不同,可分離油溶性和水溶性物質,分離相對分子質量的范圍從幾百萬到100以下。近年來,凝膠色譜柱也廣泛用于分離小分子化合物?；瘜W結構不同但相對分子質量相近的物質,不可能通過凝膠色譜法達到*的分離純化的目的。
一個含有各種分子的樣品溶液緩慢地流經凝膠色譜柱時,各分子在柱內同時進行著兩種不同的運動:垂直向下的移動和無定向的擴散運動。大分子物質由于直徑較大,不易進入凝膠顆粒的微孔,而只能分布顆粒之間,所以在洗脫時向下移動的速度較快。小分子物質除了可在凝膠顆粒間隙中擴散外,還可以進入凝膠顆粒的微孔中,即進入凝膠相內,在向下移動的過程中,從一個凝膠內擴散到顆粒間隙后再進入另一凝膠顆粒,如此不斷地進入和擴散,小分子物質的下移速度落后于大分子物質,從而使樣品中分子大的先流出色譜柱,中等分子的后流出,分子小的后流出,這種現象叫分子篩效應。具有多孔的凝膠就是分子篩。
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