在實驗過程中往往會有不盡人意的地方,比如說ELISA實驗背景過高,那么 造成ELISA試劑盒實驗背景過高的主要原因有哪些呢?
1、不正確的洗滌
洗滌不充分或省略洗滌步驟中的任何一步均會導致背景色過高。
解決方法:檢查洗滌緩沖液的體積并確保完成所有的洗滌步驟;確保洗滌緩沖液的正確稀釋和正確使用。
2、底物污染
確保在使用前,底物不被金屬離子或氧化劑污染;在實驗時留存一些額外的底物,底物本身不應該有顏色。
3、底物曝光
底物曝光會使底物變成藍色,因此在加入板內之前要保存在暗處(即試劑瓶內)。
4、HRP的錯誤稀釋
HRP濃度過高會造成高背景色,因此要嚴格按照產品說明書稀釋。
5、錯誤的孵育時間和溫度
必須嚴格按照產品說明書來定孵育時間和溫度。
6、包被板保存不當
如果包被板只用了一部分,一定要正確保存剩余的板條。
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