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雙光束紫外-可見分光光度計核查操作規(guī)程

來源:北京普析通用儀器有限責任公司   2018年12月26日 13:20  

 

1 說明

1.1 工作原理

紫外可見分光光度法是利用物質分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射的吸收來進行分析的一種儀器分析方法。這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價電子能級的躍遷,它廣泛用于無機和有機物質的定性和定量分析。

朗伯一一比耳定律(Lambet -Beer)是光吸收的基本定律,俗稱光吸收定律,是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎。當入射光波長一定時,溶液的吸光度是吸光物質的濃度c及吸收介質厚度(吸收光程)的函數(shù)。其常用表達式如下(式中ε為系數(shù))

A=ε·c·l

紫外見分光光度計是基于紫外可見分光光度法的原理工作的常規(guī)分析儀器。根據(jù)光路設計的不同,紫外可見分光光度計可以分為單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。

1.2 適用范圍

雙光束紫外-可見分光光度計(以下簡稱儀器)系指從單色器發(fā)出的單色光經(jīng)光束開關(斬光器分成為樣品和參比兩條光束結構的儀器。它能消除光源不穩(wěn)和放大器增益變化的影響,并能自動記錄和掃描物質的吸收光譜圖。儀器開機后通常做一些自檢,但仍應按本規(guī)程進行檢定。儀器波長范圍包括195~800nm狹縫為0.1~5nm可調。

1.3 制定依據(jù)

本規(guī)程主要參照國家計量檢定規(guī)程JJG 178-2007紫外、可見近紅外分光光度計》、JJF 1641-2017紫外可見分光光度計型式評價大綱》中國藥典》2015年版四部指導通則“0401紫外-可見分光光度法擬定

2.項目及技術要求

2.1 波長準確度 ≤±1.0nm(紫外區(qū)),≤±2.0nm500nm附近);

    波長重復性 ≤0.5nm

2.2 基線平直度 ≤0.01 吸光度

2.3 0%線噪聲  ≤0.1%100%線噪聲  ≤0.5%.

2.4 吸光度準確度 符合規(guī)定。

2.5 雜散光 <0.8%

2.6 光譜帶寬 ≤標示帶寬±20%

2.7 吸收池配對誤差 ≤0.5%

3 檢測條件

3.1 環(huán)境條件

3.1.1 室溫10~30相對濕度應小于65%

3.1.2 工作臺不受陽光直射,室內應無腐蝕性或其它影響測定的氣體干擾。

3.1.3 周圍影響檢定的強電場、磁場和震動。

3.1.4 儀器檢定先開機預熱半小時。

3.2 設備

鈥玻璃校正片。

3.3 標準物質和試劑

氧化鈥分析純高氯酸(分析純重鉻酸鉀(基準品硫酸(分析純碘化鈉(分析純亞硝酸鈉(分析純

4 檢測方法

4.1 波長準確度和波長重復性的檢測

4.1.1 氧化鈥溶液241.13278.10287.18333.44345.47361.31416.28451.30485.29536.64640.52nm吸收值進行檢定檢定配制4%氧化鈥的10%高氯酸溶液,將儀器波長設置為700~200nm范圍,狹縫小于1nm以空氣為空白,調節(jié)透光率為100%取上述氧化鈥溶液,置1cm石英吸收池中,放入樣品光路,以適當?shù)膾呙杷俣?/font>繪制氧化鈥溶液的吸收圖譜打印峰值,與規(guī)定值相比較。重復測定三次,取平均值,計算波長準確度與重復性。

4.1.2 用鈥玻璃校正片代替氧化鈥溶液,測定方法同上,其尖銳吸收峰主要279.4287.5333.7360.9418.5460.0484.5536.2637.5nm校正片使用前必須經(jīng)過校正。

4.2 基線平直度的檢測

4.2.1 按儀器要求進行基線校正后,調節(jié)狹縫2nm掃描速度中速,取樣間隔1nm樣品和參比光路均為空氣。在儀器波長下限10nm波長上限處減50nm范圍內進行掃描,測量圖譜中起始點的吸光度與圖譜中偏離起始點多的吸光度(即大偏離點)之差即為基線平直度。

4.2.2 允許繪制的基線在更換光源或濾光片時微有跳動,必要時可在檢定前再進行一次基線校正。

4.3 0%噪聲和100%線噪聲的測定

4.3.1 儀器設置為時間掃描方式,波長設置250nm,狹縫1nm樣品和參比光路均為空氣,調整透光率為100%,用適當的掃描速度做時間掃描2分鐘,觀察100%線的變化,然后再將擋光插入樣品光路,觀察0%線的變化2分鐘,讀出各自峰的大(的差,與規(guī)定值比較

4.3.2 儀器設置時間掃描方式波長置500nm按上述方法測定500nm波長處的100%0%線噪聲。

4.3.3 儀器無時間掃描方式,也可將儀器波長調至規(guī)定處,用目視觀察2分鐘,讀出各自峰的大(的差

4.4 吸光度準確度的檢測  將儀器波長設置于400~200nm狹縫1nm先用配對的吸收池均裝入0.005mol/L硫酸空白溶液合適的掃描速度記錄基線或自動校正基線然后再樣品光路改變放0.006%重鉻酸鉀硫酸溶液0.005mol/L硫酸空白溶液,掃描并打印峰谷值,計算吸收系數(shù),重復測定三次,取其平均值與規(guī)定的吸收系數(shù)許可范圍進行比較,應符合表中的規(guī)定。

波長nm

235

(小)

257

(大)

313

(小)

350

(大)

吸收系數(shù)(規(guī)定值

124.5

144.0

48.6

106.6

吸收系數(shù)的許可范圍

123.0~126.0

142.8~146.2

47.0~50.3

105.5~108.5

4.5 雜散光的檢查

測定前應將擋光塊插入樣品,校正儀器零點,其透光率應為0.0%。按下表的試劑濃度,配置成水溶液,置1cm石英吸收池中,在規(guī)定的波長處測定透光率,應符合表中規(guī)定。

 

試劑

濃度(%

測定用波長(nm

透光率%

碘化鈉

1.00

220

<0.8%

亞硝酸鈉

5.00

340

<0.8%

4.6 光譜帶寬的測定

4.6.1 儀器置于單光束能量測定方式,波長范圍置于660~650nm選擇小狹縫,用合適的掃描速度進行波長掃描,繪制氘燈譜線使氘燈峰值為滿量程的三分之一,測量氘峰的半峰寬即為小光譜帶寬,與規(guī)定值比較。

4.6.2 沒有氘燈的儀器選擇汞燈546.1nm(或253.7nm)的特征譜線同4.6.1方法掃描并計算。

4.7 吸收池配對誤差的檢測

4.7.1 洗凈的石英吸收池盛滿220nm,以其中一只透光率為100%,再分別更換其它吸收池,測其透光率,凡誤差在規(guī)定范圍內的,再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液,在350nm,以其中一只透光率為100%,分別測定其它吸收池,透光率誤差在規(guī)定范圍內的即為配對的吸收池。

4.7.2 洗凈的玻璃吸收池盛滿660nm,以其中一只透光率為100%,再分別更換其它吸收池,測其透光率,凡誤差在規(guī)定范圍內的,再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液,在400nm,以其中一只透光率為100%,分別測定其它吸收池,透光率誤差在規(guī)定范圍內的即為配對的吸收池。

4.7.3 由于吸收池在不同波長吸光度有少許改變,在使用時,好先測定配對誤差,必要時應扣除。

5 檢測結果處理

自檢結果全部符合技術要求者,即為合格,可以使用。若檢測結果不符合規(guī)定,重新調試儀器再進行自檢,符合規(guī)定后方可使用。

6 檢驗周期

至少每年檢測一次,重要部件的維修和更換、變動放置地點、或對儀器性能有懷疑的,應按本規(guī)程隨時進行自檢。

 

 

參考文獻

1.T9T10光束紫外-可見分光光度計使用說明書-北京普析通用儀器有限責任公司

2.JJG 178-2007紫外、可見、近紅外分光光度計》

3.JJF 1641-2017紫外可見分光光度計型式評價大綱》

4.《中國藥典》2015年版四部指導通則“0401紫外-可見分光光度法”

5.《藥品檢驗儀器自檢/核查規(guī)范-中國食品藥品檢定研究院

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