土壤硝酸還原酶(Solid-Nitrate Reductase,S-NR)試劑盒說明書
分光光度法 50管/24樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義
S-NR 催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,是土壤硝態(tài)氮還原的關(guān)鍵酶。研究 S-NR 的活性
對(duì)合理施肥,降低氮素的損失具有重要意義。
測(cè)定原理
S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ +NADH+H → NO2ˉ +NAD+ +H 2 O;產(chǎn)生的亞
+
硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對(duì)–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的
紅色偶氮化合物在 540 nm 有大吸收峰,可用分光光度法測(cè)定。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一:液體 10mL×1瓶,-20℃保存。
試劑二:液體 4mL×1瓶,-20℃保存。
試劑三:液體 12.5mL×1瓶,4℃保存(如出現(xiàn)結(jié)晶析出,60℃-90℃水浴溶解后使用)。
試劑四:液體 12.5mL×1瓶,4℃保存。
試劑五:標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液 1mL,-20℃保存。
0.1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液的配制:用時(shí)將試劑五稀釋100倍,即取0.1ml 加蒸餾水定容至10ml。
樣品處理:
新鮮土樣自然風(fēng)干或 37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。
測(cè)定操作表
混勻,室溫顯色 20min后,4000g,25℃離心10min,用蒸餾水調(diào)零,540nm下讀取各管吸
光值。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè)一次。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
S-NR活性計(jì)算:
單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)S-NR活力單位。
S-NR(μmol /d/g)=C標(biāo)準(zhǔn)×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V反總÷W÷T=12×
(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
C 標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.1μmol/mL;V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.5mL;T:反應(yīng)時(shí)間,
1h=1/24d; W:樣本質(zhì)量,0.1g。
相關(guān)產(chǎn)品
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