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內因子抗體ELISA試劑盒酶聯免疫吸附測定試劑盒

來源:上海乾思生物科技有限公司   2018年10月10日 19:31  

內因子抗體ELISA試劑盒 酶聯免疫吸附測定試劑盒

引起 ELISA 測定結果與文獻報導不一致的原因主要有三點,試劑因素、標本因素和操作因素。試劑因素:●1. 試劑應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便的試劑。 2.不同廠家的試劑一定不能混用,包括底物和洗滌液。由于校準標準有差異,還有抗體、檢測方法、試劑、交叉反應等因素都會導致對樣本的檢測結果不一致。如:有的廠家酶標板孔間 CV 值大于 20%,標記酶的活性及顯色液的穩定性比較差,使用劣質的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。 3. 要注意試劑的批號和出廠日期,雖然試劑的有效期多為 1 年,選擇剛出廠的試劑盒為宜。 4. 避免選擇假的 ELISA 試劑盒。有些廠家為夸大生產 ELISA 的指標范圍,用一種指標來冒充其它指標,造成各種種屬、各種指標都可以做的假象。標本因素和操作因素:● 血清是常用的 ELISA 標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致,分為內源性物質和外源性物質兩種。 內源性物質:有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質,可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠 Ig (s) 抗體、交叉反應物質和其它物質等。外源性物質:外源性物質常常是由于用于 ELISA測定的血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。

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● 試劑盒操作步驟如下: ● 1.用TBS或PBS制備蛋白樣品的稀釋液。稀釋度要取決于樣品中存在的抗原濃度。由于抗原濃度通常未知,因此有必要檢測寬范圍的稀釋度。 2.制備硝酸纖維素膜,用鉛筆標上每個待測一抗/二抗的濃度。所需轉印膜的數量取決于待篩查的一抗和/或二抗有多少種不同的稀釋濃度。通常來說,一抗要檢測一到兩個稀釋度,而二抗要檢測兩到三個稀釋度。 3.將硝酸纖維素膜放在濾紙上,將抗原稀釋液點在膜上。每個點的體積越少越好(1-5μl),以保證點盡可能地小。如果需要使用5μl以上的樣品,在點完一次后,干燥2-5分鐘,再點一次。讓膜干燥10-15分鐘,或直至無可見水分。 4.用封閉液封閉膜上的非特異性位點,室溫震蕩孵育1h。 5.用包含1/10體積封閉液的洗滌液稀釋一抗,并加到膜上,室溫震蕩孵育1h。 6.用洗滌液洗膜4次,每次5分鐘,用盡可能大體積的洗脫液。 7.用包含1/10體積封閉液的洗滌液稀釋二抗,并加到膜上,室溫震蕩孵育1h。 8.用洗滌液洗膜4次,每次5分鐘,用盡可能大體積的洗脫液。 9.準備底物工作液。白介素1ELISA試劑盒廠家制備足夠體積的工作液,以確保印跡點*濕潤,且印跡點在孵育過程中不會干。 10.將膜放在底物工作液中孵育5分鐘。 11.將膜取出,放在塑料布或其它防護膜上。 12.蛋白一側朝上,將印跡貼到膠片上,曝光30-60秒。為獲得*結果,曝光時間可能不同。如果*次曝光不夠,再試試2-5分鐘。 13.在一張優化好的印跡膜上,底物產生的信號可能會持續6-24小時,這取決于具體的產品。

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編輯:小檀20181010

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