(1)制備色譜的目的
制備色譜的目的,是以較低的成本從混合物中得到純凈物。制備色譜要爭(zhēng)取少用填料,少用溶劑,盡可能多的拿到產(chǎn)品。而分析色譜的目的,是對(duì)樣品進(jìn)行定性或含量。因而,制備色譜的進(jìn)樣里比較大,柱子的分離負(fù)荷的加大。而為了保證組分*分離,增加制備色譜的柱子直徑和柱子長(zhǎng)度也就是必然。
(2)樣品的前處理:
因?yàn)樯V填料的價(jià)格相對(duì)來(lái)說(shuō),比較貴。由于不可逆吸附等原因,制備色譜柱子由于處理的樣品多,壽命較短。在工藝的安排上, 要盡量把色譜分離操作放到后面;在色譜柱之前,要加預(yù)柱以延長(zhǎng)色譜填料的壽命。
(3)制備色譜柱的材質(zhì)
以前因?yàn)闂l件限制,用玻璃柱子做層析。玻璃除了易碎外,當(dāng)壓力增大的時(shí)候,密封就是較大的問(wèn)題。
有機(jī)玻璃的柱子在密封和抗壓方面有優(yōu)勢(shì),但是有機(jī)玻璃應(yīng)對(duì)有機(jī)溶劑時(shí),穩(wěn)定性不是很好。
不銹鋼柱子具有良好的耐腐蝕、抗壓力性能,雖然價(jià)格稍微貴點(diǎn),但越來(lái)越受歡迎。 當(dāng)然,玻璃和有機(jī)玻璃的有機(jī)玻璃柱子也能抗壓力耐腐蝕,相對(duì)不銹鋼柱子而言,它是半透明的,可以看到液體的運(yùn)行狀態(tài),對(duì)有色的物質(zhì)其特點(diǎn)就更為突出,但現(xiàn)在多數(shù)的化學(xué)物質(zhì)往往是無(wú)色的。
(4)固定相的選擇
硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂 、聚酰胺、 氧化鋁、 凝膠等都可以作為色譜柱的填料。
對(duì)于同一種固定相來(lái)說(shuō),粒徑和孔徑是為重要的參數(shù)。粒徑越小,價(jià)格越高。一般制備色譜,高精度的分離推薦的填料為10um,低精度的分離可以采用20-45um的填料。
(5)裝柱方法的選擇
一般來(lái)說(shuō),采用濕法裝填的效果較好。所謂“敲擊-裝填”技術(shù)只適合于粒徑大于25um的固定相。一般推薦由專業(yè)的色譜商代為濕法裝填,以保證分離效果。在柱子填完后,應(yīng)有柱效的測(cè)量,對(duì)柱效低的柱子應(yīng)該重填。
(6)流動(dòng)相的選擇
一般來(lái)說(shuō),制備色譜的溶劑要回收。①盡量不采用高毒性溶劑(如乙腈),而采用乙醇、甲醇。②對(duì)多元溶劑要盡可能的少用。比如說(shuō)乙醇、水、乙腈三元溶液,回收會(huì)變得復(fù)雜而困難。③ 盡量不要加入鹽等不揮發(fā)組分,比如說(shuō),一般用氨水而不用氫氧化鈉。用醋酸而不用鹽酸。④在制備中,為了降低成本,往往用分析純?nèi)軇踔潦轻t(yī)藥純和工業(yè)純。 在使用醫(yī)藥純和工業(yè)純,往往要用硅膠柱對(duì)溶劑過(guò)濾下,以減少熱敏反應(yīng)以及降低溶劑對(duì)泵和昂貴填料的影響。
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