olympus熒光顯微鏡的應用要點
olympus熒光顯微鏡是利用“光化熒光”成像,如果所選激發波長在肉眼所看不見的近紫外光區(320~400nm),熒光的發射光譜也較普通光鏡光源的平均波長短,光學分辨率提高。高能量的光子與電子碰撞,使得電子從基態躍遷到激發態。激發態的電子很不穩定,會重新回落到基態,這個過程中會消耗部分熱能,并發出新的光子。新的光子能量比起初的光子能量低,因此波長更長。由于新的光子波長區別于入射光的光子波長,通過一定的光學處理方法將兩束不同波長的光分開,從而使我們只看到發射出來的新光子(熒光信號),也就是olympus熒光顯微鏡看到的熒光圖像。
olympus熒光顯微鏡的預檢查和調節:
(1)每次進行熒光觀測前,必須例行檢查熒光裝置的燈絲對中、光路對焦、孔徑光闌、視場光闌設置等狀況。
(2)所需要的熒光激發/發射濾光片組件是否已裝在轉換器中,olympus熒光顯微鏡物鏡配置是否得當,除去物鏡前透鏡的油漬和灰塵。
(3)如同時進行透射光相差觀察,要檢查聚光鏡對中心及相差環與物鏡相反的共軛情況。
(4)檢查樣品載體(載玻片、蓋玻片和其他器皿)有否掛有液體、灰塵,厚度是否在物鏡標定的工作距離范圍內。切片樣品不能太厚,約≤10μm為宜。
(5)因照明光源含有紫外線,在載物臺前上方放一塊棕色遮光板,以防紫外線損傷視網膜。
(6)電壓不穩會降低高壓汞燈的使用壽命,光源電源加配穩壓器。
(7)為延長汞燈壽命,在開啟后15min方可關閉;汞燈熒光電源一旦關閉,再次啟動至少需等待10min,以使水銀蒸汽冷卻復至原態,否則會影響燈的壽命。
olympus熒光顯微鏡的像觀察:
(1)在開啟熒光燈源后約5~10min激發光強度趨于穩定,裝載樣品進行觀察;為防止在調焦和尋找物像過程中過度激發光照會造成樣品熒光淬滅,先通過縮小olympus熒光顯微鏡的孔徑光闌或加ND濾光片將激發光調節到適度強度,有規律地移動樣品臺,待確定鏡像后,在調節到熒光狀態用于拍攝記錄。
(2)鏡像質量不佳的調整。排除樣品制備因素外,可進行的必要調節措施是:
①排除成像光路中的遮光或限光器件,如DIC附件、ND濾光片等。
②重新調節olympus熒光顯微鏡的收光器對焦和孔徑光闌大小。
③細心調節olympus熒光顯微鏡物鏡覆蓋差校正環。
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