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NP-40 裂解液

來源:青島捷世康生物科技有限公司   2018年06月25日 14:24  

NP-40 裂解液

產品簡介:

    多種成分均可以從細胞中提取總蛋白,如 Triton、SDS、NP-40 等。NP-40 裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是采用一種溫和的裂解方法獲得總蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質可以用于 PAGE 電泳、Western、免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等,并含有多種蛋白酶抑制劑成分,可有效抑制蛋白的降解,并維持原有的蛋白間相互作用。

    Jisskang NP-40 Lysis Buffer 主要由Tris-HCl、NaCl、NP-40 以及sodium pyropho-sphate,β-glycerophosphate,sodium fluoride, EDTA等多種蛋白酶抑制劑組成。用NP-40 Lysis Buffer得到的蛋白,可以用BCA蛋白定量試劑盒和Bradford蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。

產品組成:

   產品組成

   規格

Storage

NP-40 Lysis Buffer

   100ml

-20℃

PMSF(100mM)

1.5ml

-20℃

使用說明書

            1份

操作步驟(僅供參考):

(一)貼壁培養細胞

1、取NP-40 Lysis Buffer置于室溫溶解混勻,加入PMSF,使PMSF終濃度為 1mM。

2、去除貼壁細胞的培養液,用 PBS、NS 或無血清培養液清洗1次,低速離心,棄上清,留取沉淀。

3、按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入NP-40 LysisBuffer 。移液器輕輕吹打,使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解15~30min,通常裂解液作用于細胞1~3s內,細胞就會被裂解。

4、10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

5、進行后續的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)懸浮培養細胞

1、取 NP-40 Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻,加入 PMSF,使 PMSF 終濃度為 1mM。低速離心懸浮細胞,棄上清,收集沉淀。

2、用手指輕彈細胞,使其松散。按照6孔板每孔細胞加入150~200μl含有PMSF的裂解液的比例,加入NP-40 Lysis Buffer 。通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200~250μl。再用手指輕彈以充分裂解細胞,充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。

3、10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

4、進行后續的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)組織樣本

1、取 NP-40 Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻,加入 PMSF,使 PMSF 終濃度為 1mM。把組織剪切成細小的碎片,越小越好。

2、取在液氮或超低溫冰箱中冷凍 30min 以上的組織,迅速用液氮研磨,研磨過程盡量控制在1~2min之內,以減少蛋白的降解。

3、按照每20mg組織加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解30~60min。

4、步驟3、4亦可以采用如下過程:按照每 20mg組織加入150~250μl裂解液的比例,加入含有PMSF的NP-40 Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,直至充分裂解,該過程盡量控制在1~2min之內,以減少蛋白的降解。

5、10000~12000g,4℃離心5~15min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

6、進行后續的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事項:

1、在貼壁培養細胞的操作步驟中,去除貼壁細胞的培養液后,如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不用清洗。

2、如果裂解丌充分可以適當增加裂解液的用量,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。

3、在培養細胞的裂解中,如果細胞量較多,必需分裝成 50~100 萬細胞/離心管,然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分,而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸,相對比較容易裂解充分。

4、如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是丌如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

5、溶解 Leagene NP-40 Lysis Buffer 時,應盡量縮短溶解時間,避免裂解液中的有效成分失效。

6、細胞裂解的操作步驟,應置于冰上或 4℃進行。

7、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期:12個月有效。

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