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在液相色譜中對組分復雜的樣品廣泛采用梯度洗脫的方法。梯度洗脫是指在同一個分析周期中隨著時間的變化按一定程序梯度性地改變洗脫液的比例(濃度配比、成分、離子強度、溶液極性等)或pH，以期將層析柱上不同的組分洗脫出來的方法。
在液相色譜中梯度洗脫裝置分兩種：
1.高壓梯度：用兩臺高壓輸液泵將兩種溶劑輸入
2.低壓梯度：在常壓下將兩種溶劑（或多元溶劑）混合，然后用高壓輸液泵將流動相輸入到色譜柱中。
梯度洗脫可提高分離度、縮短分離時間、降低小檢測量和提高分離精度。
梯度洗脫使用時應注意:
1、注意各溶劑間的互溶性。
2、對溶劑的純度要求更高（影響重現性）。
3、注意梯度變化時系統壓力的變化，防止超出限度。
4、梯度結束后，用初始流動相沖洗，使柱子平衡一段時間（再生），使系統回復到初始狀態。（梯度周期）
5、低壓梯度要注意脫氣，混合后容易產生氣泡。
6、容易出現鬼峰，應作空白試驗。
7、梯度選擇時盡量幾相之間相變化要小,否則不易平衡。
8、梯度洗脫應使用對流動相組成變化不敏感的選擇性檢測器（如紫外吸收檢測器或熒光檢測器），而不能使用對流動相組成變化敏感的通用型檢測器（如示差折光檢測器）。
9、要注意水相中鹽的濃度，防止在有機相提升過程中鹽的析出。
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