細胞培養實驗室如何構建無菌操作環境

一、細胞培養及其實驗室說明

 組織培養是在體外模擬體內生理環境，在無菌、適當溫度和一定營養條件下，使從體內取出的組織生存、生長繁殖和傳代，并維持原有的結構和功能特性。

 所謂細胞培養是指細胞包括單個細胞在體外條件的生長。

 組織細胞培養技術與其他一般實驗室工作的主要區別在于要求保持無菌操作，避免微生物及其他有害因素的影響。目前，超凈工作臺的廣泛使用，很大程度上方便了組織細胞培養工作，并使一些常規實驗室有可能用于進行細胞培養。

細胞培養實驗室應能進行六方面的工作：無菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲藏。

二、細胞培養實驗室無菌操作環境的構建

1、無菌操作室

無菌操作區只限于細胞培養及其他無菌操作的區域，zui能與外界隔離，不能穿行或受其他干擾。

理想的無菌操作室應劃為三部分：

a) 更衣室—―供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。

b) 緩沖間—―位于更衣間與操作間之間，目的是為了保證操作間的無菌環境，同時可放置恒溫培養箱及某些必需的小型儀器。

c) 無菌操作間—―于無菌操作、細胞培養。其大小要適當，且其頂部不宜過高(不超過2.5m)以保證紫外線的有效滅菌效果;墻壁光滑*以便清潔和消毒。

工作臺安置不應靠墻壁，臺面要光滑壓塑作表面，漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。

無菌操作間的空氣消毒：紫外線燈—-產生臭氧，并且室內溫度及濕度均較高，不利于工作人員健康。

空氣過濾的恒溫恒濕裝置—-。

潔凈室(區)空氣潔凈度級別表潔凈度級別：

塵粒zui大允許數/立方米 100級 3,500 0 5 110000級

微生物zui大允許數 350,000 2,000 100 3100000級

浮游菌/立方米 3,500,000 20,000 50010300000級

沉降菌/皿 10,350,000 60,000 - 15

無臭氧紫外線消毒器電子消毒滅菌器—-在高壓電場作用下，電子管的內外電極發生強烈電子轟擊，使空氣電離而將空氣中的氧轉換成臭氧。臭氧是一種強氧化劑，能同細菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進行氧化分解反應，從而靠臭氧氣體彌漫性擴散達到殺菌之目的，消毒時沒有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需30～40min即能自行還原成氧氣，空氣不留異味，消毒物體表面不留殘毒。

2、凈化工作臺

操作簡單，安裝方便，占用空間小且凈化效果很好。

一般細菌培養室使用的凈化工作臺主要有兩種：

a)側流式或稱垂直式

b)外流式或稱水平層流式。

凈化工作臺工作原理大致相同，通常是將室內空氣經粗過濾器初濾，由離心風機壓入靜壓箱，再經空氣過濾器精濾，由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風速通過無菌區，從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環境。

側流式工作臺：空氣凈化后的氣流由左或右側通過工作臺面流向對側，也有從上向下或從下向上流向對側，形成氣流屏障保持工作區無菌。工作臺結構為封閉式。

外流式(水平式)工作臺：凈化后的空氣面向操作者流動，因而外方氣流不致混入操作，但進行有害物質實驗操作則對操作者不利。