成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養箱


化工儀器網>技術中心>工作原理>正文

歡迎聯系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

酶聯免疫吸附試驗方法類型及反應原理

來源:南京賽泓瑞生物科技有限公司   2011年03月22日 18:35  

                               酶聯免疫吸附試驗方法類型及反應原理

ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體;②酶標記的抗原或抗體;③酶作用的底物。根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設計出各種不同類型的檢測方法。

  (一)雙抗體夾心法

  雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,操作步驟如下:

  (1)將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體:洗滌除去未結合的抗體及雜質。

  (2)加受檢標本:使之與固相抗體接觸反應一段時問,讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合,形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。

  (3)加酶標抗體:使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量成正相關。

  (4)加底物:夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。

  根據同樣原理,將大分子抗原分別制備固醫學教丨育網整理相抗原和酶標抗原結合物,即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。

  (二)雙位點一步法

  在雙抗體夾心法測定抗原時,如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體,則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點一步法不但簡化了操作,縮短了反應時間,如應用高親和力的單克隆抗體,測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。

  在一步法測定中,應注意鉤狀效應(hookeffect),類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再醫學教丨育網整理形成夾心復合物,所得結果將低于實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。

  (三)間接法測抗體

  間接法是檢測抗體zui常用的方法,其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體,故稱為間接法。操作步驟如下:

  (1)將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原:洗滌除去未結合的抗原及雜質。

  (2)加稀釋的受檢血清:其中的特異抗體與抗原結合,形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質由于不能與固相抗原結合,在洗滌過程中被洗去。

  (3)加酶標抗抗體:與固相復合物中的抗體結合,從而使該抗體問接地標記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體,可用酶標羊抗人IgG抗體。

  (4)加底物顯色:顏色深度代表標本中受檢抗體的量。

  本法只要更換不同的固相抗原,可以用醫學教丨育網整理一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應的抗體。

  (四)競爭法

  競爭法可用于測定抗原,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合,因此結合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量成反比。操作步驟如下:

  (1)將特異抗體與固相載體連接,形成固相抗體。洗滌。

  (2)待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原醫學教丨育網整理的混合溶液,使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原,則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原,則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合,競爭性地占去了酶標抗原與固相載體結合的機會,使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原,保溫后,酶標抗原與固相抗體的結合可達zui充分的量。洗滌。

  (3)加底物顯色:參考管中由于結合的酶標抗原zui多,故顏色zui深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差,代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡,表示標本中抗原含量越多。

  (五)捕獲法測IgM抗體

  血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在,后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法,先將所有血清IgM(包括特異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再測定特異性IgM。操作步驟如下:

  (1)將抗人IgM抗體連接在固相載體上,形成固相抗人IgM。洗滌。

  (2)加入稀釋的血清標本:保溫反應后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質成分。

  (3)加入特異性抗原試劑:它只與固相上的醫學教丨育網整理特異性IgM結合。洗滌。

  (4)加入針對特異性的酶標抗體:使之與結合在固相上的抗原反應結合。洗滌。

  (5)加底物顯色:如有顏色顯示,則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在,是為陽性反應。

  (六)應用親和素和生物素的ELISA

  親和素是一種糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,每個分子由4個亞基組成,可以和4個生物素分子親密結合。現在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素。生物素又稱維生素H,分子量244.31,存在于蛋黃中。用化學方法制成的衍生物,生物素-羥基琥珀亞胺酯(BNHS)可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素醫學教丨育網整理化的產物。親和素與生物素的結合,雖不屬免疫反應,但特異性強,親和力大,兩者一經結合就極為穩定。由于1個親和素分子有4個生物素分子的結合位置,可以連接更多的生物素化的分子,形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯起來,就可大大提高ELISA的敏感度。

  親和素-生物素系統在ELISA中的應用有多種形式,可用于間接包被,亦可用于終反應放大。可以在固相上先預包被親和素,原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結合,通過親和素-生物素反應而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量,而且使其結合點充分暴露。另外,在常規ELISA中的酶標抗體也可用生物素化的抗體替代,然后連接親和素-酶結合物,以放大反應信號。

免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
企業未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
主站蜘蛛池模板: 久久超碰国产老太精品最新| 国产毛A片啊久久久久久保和丸| 欧美大片免费看| 日韩欧美国产三级在线观看| 99热成人精品国产免费| av我要看| 美女内射视频WWW网站午夜| 日韩国产精品人妻无码久久久| 中文字幕一区二区视频| 亚洲色图26p| 国产真实女人一级毛片| 日韩在线中文字幕观看| 亚洲国产欧美日韩精品一区二区三区| 摸BBB揉BBB揉BBB视频| 乱码午夜-极品国产内射| 精品久久久久久蜜臂臀| 国色天香WWW视频| 日本xxx极品videos高清| 亚洲区欧美日韩综合| 欧美日韩一区二区三区高清| 爆乳女神玩具酱护士| 欧美日韩一级高清电影网站片| J8又粗又硬又大又爽又长A片| 亚洲国产精品不卡Av在线| 亚洲人妻高清久久中文字幕| 久久久噜噜噜久久熟女av| 吃瓜网今日吃瓜热门大瓜| WWW国产亚洲精品久久小说| 国产精品久久久久一区二区三区共| 太大太长又硬放进去很爽| 日韩欧美aⅴ综合网站发布| 欧美又黄又爆的A片| 国产亚洲第一伦理第一区| 欧美精品狠狠色丁香婷婷| 污污内射久久一区二区欧美日韩| 罚男仆夹震蛋器憋尿虐乳双性| 国产又黄又爽又色的免费APP| 国产精品VIDEOSSEX久久发布| 男人天堂香蕉网| 亚洲精品日韩欧美在线| 日韩 在线 中文字幕|