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固相萃取技術時操作步驟

來源:上海屹利科學儀器有限公司   2018年04月25日 09:16  

 

  1. 盡量慢

    我們在用固相萃取時,面臨的一個問題就是:液體應該以什么速率過柱流出,我的經驗是,要想效果好,就要慢,盡量慢。

  對于固相萃取柱中的填料,我們如果局部放大地看,能夠看到其實它們是有很多的空隙,液體流通的渠道很多,如果流得快,相當比例的待測組分還來不及與填料充分作用就地從通道流失;所以要慢,給它們一個充分作用的機會。

  如何慢呢?一個竅門就是不要用配合抽氣機使用的所謂固相萃取器,而采用再普通不過的重力法。利用重力的作用使液體向下流出。在實驗速度上,重力法遠不如吸力法,但是在實驗效果方面,重力法遠比吸力法優勝,用吸力法只能得到譜帶吸附,用重力法卻能得到柱頭吸附,在速度和效果兩者的平衡中,我們還是傾向于優先保證好的效果。

  舉例來說,一個3 ml 500mg的C18小柱,如果加甲醇活化,其甲醇全部流至篩板時間約為20分鐘,而在過樣品液時,25ml的液體zui多2 小時可以流完,而且用重力法如果得當,工作速率不一定比吸力法差很多。因為我們可以充分利用空閑時間,用吸力法必須有人在旁邊守候,而重力法由于不需要用電,可以充分利用午休和晚上時間過柱,液體量大時接個堆疊接頭和延長管即可,安排好實驗步驟,工作效率一樣很高。另外,重力法不需要抽氣機和固相萃取器。

  2. 盡量少

  在固相萃取條件選擇上,有人為了提高提取效率,盡量多加液體,或選擇填料量大的小柱,我覺得大可不必如此。尤其在用重力法時,由于效率高,很多情況下是柱頭吸附,并不是所有的填料都在起作用,填料多了不僅液體流出速度會更慢,而且在洗脫時的擴散會很明顯。

  因此建議,夠用就行,在能保證效率時,填料盡量少,加液也不宜多。

  3. 實驗條件不宜過分細化

  固相萃取從原理上是色譜分離,但是在操作時只把它作為吸附萃取劑使用,由于填料性質、松緊常有差異,因此在實際實驗中不必因為追求效果的*化而設計出很復雜的洗脫程序。

  在建立條件中,我們應該盡量多利用現成的資料,盡快地建立起體系,同時要對操作過于復雜的步驟保持警惕性,在實驗效果,實驗速率和易操作性三者中取得平衡點。

  4. 只用一次

  固相萃取柱只用一次。因為從嚴格的意義上來說,很多物質的吸附是不可逆的,一次吸附,無法洗脫,影響著下一次吸附,雖然有人做過重復利用的實驗,但是總體來說為了節省一點經費而大大增加了結果的不可靠性和不確定性,是很不合算的行為。

  因此建議,只用一次。如果想節省經費可以從減少填料量和使用小容積管入手,盡量用堆疊接頭和延長管。

  5. 慎用固相萃取器

  所有的供應商都會在推薦固相萃取柱的同時,也會推薦固相萃取器,zui簡單的固相萃取器也要幾千,如果貼個進口商標價格更要加幾倍,這樣的價格還不包括抽氣機。但是這樣的配置就是再加上調速開關,也很難得到好的結果,主要問題就是把小柱的不平行性放大了。

  建議:實在不適合重力法的才用固相萃取器。

  至于全自動固相萃取器,應該說,現在市面上還沒有比較理想、適合食品檢測的機器,主要問題就是無法解決一批小柱中液面下降不一致的問題,加上價格很昂貴,性價比也自然不高。帶液面測量的也不能對多批量的小柱同時檢測,且有交叉污染的危險。

  目前的全自動固相萃取器基本上是走重力法路線,倒是回避了密封的難題。

  6. 不可忽視傳統的液體萃取

  有些人在初次接觸固相萃取時,總覺得它能取代液體萃取,實際上就象毛細管電泳無法取代液相色譜一樣。固相萃取在某些場合比液體萃取合適,但是在更多情況下,還是傳統的液體萃取更可靠更合適。這一點從目前實驗技術的實際發展可以得到印證。

  關于液固萃取,我們不要僅僅把它看作是一個提取過程,從另一個角度來看,它還是一個凈化過程,是把固形干擾物排除凈化的過程。理解這一點,有助于我們優化選擇實驗方法。

  7. 實用性是實驗設計成功與否的zui終準繩

  在設計一個實驗時,開始要考慮到其技術上是否*。而在實際運用中,zui終決定這個方法是否可行,是否能夠存在的關鍵是實用性。一個實驗方法不僅要解決問題,而且能夠在人力,物力,財力三方面達到平衡,且滿足可持續、可重復操作的要求。

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