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離子交換色譜柱的選擇

來(lái)源:東曹(上海)生物科技有限公司   2018年04月23日 11:51  

離子交換色譜柱既有聚合物基質(zhì)色譜柱也有硅膠基質(zhì)色譜柱。然而,不像在反相的領(lǐng)域硅膠柱占絕大部分占有率,離子交換模式中聚合物色譜柱和硅膠色譜柱使用頻率相近。離子交換色譜柱在蛋白質(zhì),核酸等生物化學(xué)領(lǐng)域被廣泛利用。絕大多數(shù)重組蛋白純化都要用到離子交換。離子交換色譜的基礎(chǔ)是高分辨率,可以直接放大規(guī)模應(yīng)用在工業(yè)上,柱再生容易,還可以使蛋白濃縮。

離子交換色譜柱的選擇:

1、介質(zhì)的選擇
離子交換介質(zhì)首先要考慮目的分子的大小,因?yàn)槟康姆肿訒?huì)影響其接近介質(zhì)上的帶電功能集團(tuán),因此也會(huì)影響介質(zhì)對(duì)目的分子的動(dòng)力載量,從而影響其分離。
對(duì)于大多數(shù)純化步驟來(lái)說(shuō),建議從開(kāi)始的階段使用強(qiáng)離子交換柱,可在摸索方法的過(guò)程中有一個(gè)寬的pH范圍。對(duì)于已知等電點(diǎn)的蛋白質(zhì),可根據(jù)其等電點(diǎn)來(lái)選擇。而未知等電點(diǎn)的蛋白質(zhì),在實(shí)際操作中常采用這樣的方法,先選擇一個(gè)陰離子交換劑,再選擇一個(gè)中性的pH緩沖液,將蛋白質(zhì)樣品透析至pH7.0,然后過(guò)陰離子交換柱。根據(jù)過(guò)柱后的結(jié)果確定下一個(gè)使用的緩沖液pH。
2、流動(dòng)相的選擇
離子交換色譜的流動(dòng)相必需是有一定離子強(qiáng)度的并對(duì)pH有一定緩沖能力的溶液。為了避免目的蛋白失活,使用緩沖液可穩(wěn)定流動(dòng)相的pH,使之在色譜過(guò)程中不發(fā)生明顯變化,同時(shí)可穩(wěn)定目的分子上的電荷量,保證色譜結(jié)果的重要性。
選擇緩沖液一般按照以下原則:陽(yáng)離子交換劑應(yīng)選用陰離子緩沖液,可用檸檬酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽、甘氨酸鹽等;陰離子交換劑應(yīng)選用陽(yáng)離子緩沖液,可用烷基胺、Tris、氨基乙醇胺、乙二胺、咪唑等;起始緩沖液的濃度應(yīng)盡可能低(
3、色譜柱的選擇
離子交換色譜通常選用粗短柱,即高徑比小的色譜柱。典型的離子交換柱高度在5~20cm,高徑比一般小于5。如果需要增加離子交換劑的體積,只能從增加柱的直徑而不能增加其高度。如果是連續(xù)梯度洗脫,可以適當(dāng)增加柱的長(zhǎng)度。
 

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