類胡蘿卜素( carotenoids)是一類重要的天然色素的總稱, 普遍存在于動物、高等植物、真菌、藻類的黃色、橙紅色或紅色的色素之中。它是含40個碳的類異戊烯聚合物, 即四萜化合物。典型的類胡蘿卜素是由8個異戊二烯單位首尾相連形成。類胡蘿卜素的顏色因共軛雙鍵的數目不同而變化。共軛雙鍵的數目越多, 顏色越移向紅色。迄今, 被發現的天然類胡蘿卜素已達700多種, 根據化學結構的不同可以將其分為兩類, 一類是胡蘿卜素(只含碳氫兩種元素, 不含氧元素,如B2胡蘿卜素和番茄紅素), 另一類是葉黃素(有羥基、酮基、羧基、甲氧基等含氧官能團, 如葉黃素和蝦青素) 。
ɑ和ß胡蘿卜素因其結構性質相似,分離是液相檢測的一個難點。常規鍵合相如C18很難將這兩種異構體實現基線分離。
本文采用賽默飛Acclaim C30色譜柱按照GB5009.83-2016方法對ɑ和ß胡蘿卜素進行分離,分離度可達到2.4.
樣品前處理
α-胡蘿卜素:25ug/ml,甲醇-甲基叔丁基醚溶解,再用初始流動相1:1稀釋;β-胡蘿卜素:80ug/ml,正己烷溶解,再用初始流動相1:1稀釋;
色譜條件:
色譜柱(貨號):Acclaim C30
4.6×150 mm,3 μm(貨號:075723)
流動相:A:甲醇:乙腈:水=73.5:24.5:2
B:甲基叔丁基醚
流速:1mL/min
檢測器:UV,450nm
柱溫:20℃
進樣量:20μL
儀器:Ultimate 3000
結論
按照國標GB5009.83-2016分析胡蘿卜素異構體,可以實現α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素2.39的分離度。且方法重現性良好。
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