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影響色譜柱性能因素有哪些?

來源:東曹(上海)生物科技有限公司   2018年03月30日 08:37  

色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。

 

影響色譜柱性能因素有:

 

一、物理因素:

 

(1) 硅膠純度:硅膠純度和殘留金屬離子濃度,硅膠的雜質(zhì)會(huì)影響化合物的峰形,硅膠表面的金屬含量高會(huì)影響堿性化合物的峰形,易發(fā)生拖尾。

(2) 色譜柱尺寸填料床的長度和內(nèi)徑,增加色譜柱長度,可以在一定程度上提高柱效,但也會(huì)升高壓力和導(dǎo)致峰展寬;寬柱徑,提高載樣量,但也會(huì)增加橫向擴(kuò)散,同樣會(huì)導(dǎo)致峰展寬。窄柱徑可以節(jié)約溶劑,可減少橫向擴(kuò)散,但壓力較大,對系統(tǒng)要求較高。

(3) 顆粒形狀及粒徑球形顆粒柱效高、重現(xiàn)性好、柱床結(jié)構(gòu)均勻,不規(guī)則形柱床結(jié)構(gòu)不均勻、流動(dòng)相線速度不均勻,容易譜帶展寬;平均顆粒直徑,粒徑越小,柱效越高,柱壓也越高。粒徑分布越廣則柱效越低,壓力越大。

(4) 顆粒表面積:顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和,以m2/g表示,相對而言高表面積對樣品具有較強(qiáng)的保留能力,更大的柱容量和分離度。而低表面積能更快達(dá)到平衡狀態(tài),更適合梯度洗脫程序。

(5) 孔徑:顆粒的孔或腔的平均尺寸,范圍是80~300?,大孔徑的填料顆粒可以延長大分子溶質(zhì)在填料表面的滯留時(shí)間,改善分離,所以大孔徑填料適合分離大分子化合物或者水動(dòng)力體積較大的分子。

 

二、化學(xué)因素:

 

(1) 鍵合類型及鍵合相:鍵合相分子與基體單點(diǎn)相連為單體鍵合,這種鍵合方式可以提高傳質(zhì)速率,縮短柱平衡時(shí)間,;聚合體鍵合為鍵合相分子與基體多點(diǎn)相連,這種鍵合方式可以增加色譜柱穩(wěn)定性,增加載樣量。而鍵合相不同會(huì)直接影響化合物的保留行為。

(2) 碳覆蓋率:高碳覆蓋率可以提高分辨率和重現(xiàn)性,但分析時(shí)間長。

(3) 封端:硅膠鍵合相填料中有部分未封端的殘留硅羥基,如圖封端可以減輕待測組分與硅膠表面殘留的酸性硅羥基反應(yīng),改善保留和峰行,這對于堿性化合物尤其重要。而不同的封端技術(shù)也會(huì)直接影響色譜柱的效能。

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