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色譜柱的技術(shù)發(fā)展與展望

來源:上海屹利科學(xué)儀器有限公司   2018年03月19日 12:15  

    伴隨著生命科學(xué)、醫(yī)藥學(xué)及環(huán)境、食品安全等領(lǐng)域的強勁需求與發(fā)展,已很成熟的HPLC技術(shù)獲得了新的推動力,面臨著新的挑戰(zhàn)和發(fā)展機遇。這些新的需求可歸納為:更高的分離效率、更快的分離速度、更好的化學(xué)穩(wěn)定性、更大的峰容量和更適宜的分離模式。此外,針對痕量樣品的分離分析,對檢測靈敏度也提出了更高的需求。面對這些挑戰(zhàn)與需求,作為色譜儀和色譜技術(shù)核心的色譜柱,近年來發(fā)展迅速,取得了更顯著的發(fā)展。近年來,色譜技術(shù)的新進(jìn)展主要包括:細(xì)粒徑填料及色譜柱、超純硅膠基質(zhì)及高化學(xué)穩(wěn)定性填料、整體柱技術(shù)、親水作用色譜柱等。

  針對、快速、高通量的要求,細(xì)粒徑填料,特別是亞2微米尺度硅膠基質(zhì)填料取得了長足的發(fā)展,并直接催生了超也是超高壓色譜系統(tǒng)的出現(xiàn)。早在2005年Waters公司向市場推出了UPLC系統(tǒng),所使用的1.7?m的雜化型填料;嗣后,日本分光、安捷倫、珀金埃爾默、島津、戴安等公司也相繼推出了相應(yīng)的超效或超快液相系統(tǒng)。這些系統(tǒng)均使用了亞2微米填料或2微米填料填裝的柱子。但是,根據(jù)色譜動力學(xué)理論可知,柱子所需壓力將隨粒徑減小呈平方增長,此外,由于*線速度與粒徑成反比,此時,若要得到*流速,還必須提高流速。綜合考慮兩個因素,柱壓降將與粒徑的三次方成反比。因此,為取得高柱效就必須大幅提高流動相的驅(qū)動壓力。

  傳統(tǒng)的以硅膠為基質(zhì)的HPLC填料,因其本身性質(zhì)的局限以及殘余硅羥基和雜質(zhì)金屬離子的影響,存在對極性溶質(zhì)的非特異性吸附和化學(xué)穩(wěn)定性較差的問題。此問題,可從三方面入手加以解決:一是采用超純硅膠基球,二是采用特殊的鍵合試劑和反應(yīng)控制方法,三是發(fā)展聚合基質(zhì)填料。目前,這一問題已經(jīng)得到了較好的解決。

  整體柱(monolithic column)是用原位聚合和類似澆鑄的方法制備的整體、連續(xù)的柱體組裝的色譜柱。整體柱具有雙孔結(jié)構(gòu),即同時具有微米級的大孔和納米級的小孔,因此,柱子具有較高的柱效但柱壓卻很低,H-u曲線也較平坦。此外,由于基質(zhì)的純度很高,使得這種整體柱的化學(xué)穩(wěn)定性亦很好。因此,人們普遍對其給予厚望。但是,整體柱柱間重現(xiàn)性問題限制了其更廣泛的應(yīng)用,是一個亟待解決的難題。

  生物醫(yī)藥色譜中往往需要面對強極性化合物的分離問題,但常用的反相色譜對強極性化合物如糖及糖綴合物、糖肽等的分離幾乎無能為力,故而迫切需要發(fā)展新的色譜分離模式。親水作用色譜(HILIC)應(yīng)運而生。此外,石墨化碳柱因其特殊的選擇性而適用于強極性物質(zhì)的分離。混合模式柱或表面嵌入極性基團的方法也可以使其可同時分離極性和非極性物質(zhì),在用途上和HILIC具有類似性。

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