特殊石蠟切片組織衰老特異性脂褐素靛酚原位直接染色試劑盒產(chǎn)品說明書

（中文版）

主要用途

 特殊石蠟切片組織衰老特異性脂褐素靛酚原位直接染色試劑是一種旨在使用特殊脫蠟處理和非離子化還原性染料靛酚溶解氧化技術(shù)，分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中（zui大程度保留的）脂褐素沉積現(xiàn)象，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到紅色表達(dá)的細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識別和探測衰老細(xì)胞的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的脂褐素檢測，但不適用于人體心肌組織和小鼠腦組織的脂褐素檢測，與紅細(xì)胞產(chǎn)生不同染色。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。  

技術(shù)背景

細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期，表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，其中脂褐素顆粒聚集增多成為細(xì)胞衰老的特征性生物學(xué)標(biāo)記。脂褐素（lipofusin），又稱為“磨損（wear and tear）”色素，是一種細(xì)胞內(nèi)與年齡相關(guān)的熒光胞漿顆粒色素，主要在有絲分裂后細(xì)胞的繼發(fā)性溶酶體內(nèi)。脂褐素常見于老年人的永恒性非分裂性組織細(xì)胞里，例如心臟、肝臟和神經(jīng)等，尤其在衰老誘導(dǎo)的細(xì)胞退變中聚集增多，特別是萎縮的組織。脂褐素來自于氧化的蛋白和脂質(zhì)，成為細(xì)胞衰老中后期的獨(dú)立指征。染料二氯酚靛酚（2,6-Dichlorobenzenone-indophenol或2,6-Dichlorophenolindophenol）經(jīng)過酸化處理還原且非離子化，具有脂溶性，特異性染色組織細(xì)胞中的脂褐素，除人體心肌組織和小鼠腦組織外。同時(shí)使紅細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色。由于石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過程中，有機(jī)溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質(zhì)成分，因此使用非二甲苯類脫蠟，以zui大程度保護(hù)組織中的脂質(zhì)成分是二氯酚靛酚染色的關(guān)鍵。

產(chǎn)品內(nèi)容

 脫蠟液（Reagent A）          50毫升

 凈化液（Reagent B）   10毫升

 清理液（Reagent C）  150毫升

 染色液（Reagent D）    5毫升

產(chǎn)品說明書           1份

保存方式

保存 染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；  染色液（Reagent D）避免光照；有效保證6月

用戶自備

烘箱：用于石蠟切片處理

小型染色缸：用于樣品操作的容器

光學(xué)顯微鏡：用于觀察染色后的組織細(xì)胞

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開始前，從－20℃冰箱里取出 染色液（Reagent D），在室溫下融化，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

• 脫蠟處理

• 取出待測的6微米厚的石蠟包埋的組織切片
• 放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
• 室溫下靜置15分鐘
• 小心加上500微升 脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的 脫蠟液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至6一次
• 小心加上200微升 凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的 凈化液（Reagent B）
• 小心加上200微升 清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent C）

二、 樣本染色處理

• 小心加上100微升 染色液（Reagent D），鋪滿整個切片樣品表面（注意：加入前混勻 染色液（Reagent D）；參見注意事項(xiàng)7）
• 室溫下孵育5分鐘，或直至可見紅色，避免光照
• 小心移去切片上的 染色液（Reagent D） 
• 室溫下，小心將切片置入50毫升 清理液（Reagent C）中5次（2秒/次）（注意：參見注意事項(xiàng)8）
• 輕輕移去切片上的 清理液（Reagent C） 
• 放上蓋玻片或封片（水相或中性樹脂）（注意：參見注意事項(xiàng)9）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：脂褐素陽性細(xì)胞呈現(xiàn)紅色，非脂褐素細(xì)胞呈現(xiàn)無色、藍(lán)色或淡粉紅色，紅細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 本產(chǎn)品不適合人體心肌組織和小鼠腦組織染色
• 本產(chǎn)品適合于含有紅細(xì)胞的樣本
• 建議用戶避免使用常規(guī)石蠟包埋組織切片，即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理
• 使用時(shí)，避免污染母液
•  染色液（Reagent D）避免光照；由于溶液較酸，操作時(shí)注意安全
• 染色后清洗不宜過久，否則容易褪色
• 封片處理忌用極性脂類溶劑，例如乙醇等，否則會去除色素
• 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察，放置過久，染色會出現(xiàn)褪色
• 本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色清晰