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正相色譜和反相色譜的應用場合介紹

來源:東曹(上海)生物科技有限公司   2017年12月06日 09:09  
在液相色譜儀分析中,根據(jù)流動相和固定相相對極性的不同,可分為正相色譜反相色譜。所謂正相色譜是指固定相極性大于流動相極性的情況,反之,固定相的極性小于流動相的極性,則稱為反相色譜。

正相分析的場合:
 
假設使用的溶劑是15%二氯甲烷/己烷混合溶液,樣品在二氯甲烷中更易溶解。如果樣品可以在流動相中*溶解自然沒有問題。
如果樣品不能溶解在溶劑中,選擇100%二氯甲烷作為溶劑的情況下可能會產(chǎn)生故障。 
在一般情況下,經(jīng)常使用混合溶劑作為流動相。哪種組合zui易于樣品溶解可以從樣品的洗脫時間上看出。在選擇溶解樣品的
溶劑之前,把流動相的組成在5~10%變化范圍內(nèi)各種樣品的洗脫時間作比較,選擇樣品zui容易溶解的溶劑。因為,樣品和溶
劑、流動相互相溶解是分析的前提條件。

反相分析的場合:
 
假設使用的溶劑是50%的乙腈,使用的樣品在乙腈中比在水中更易溶解。當然,的方法是使樣品*溶解于流動相中。
然而,如果樣品不能溶解在流動相中,如何選擇溶劑呢?100%的乙腈溶液?或者濃度50%以下的乙腈水溶液? 
這種情況下,*個選擇就是濃度50%以下的乙腈水溶液。第二個選擇就是100%的水溶液,可以100~500微升注入。
zui差的選擇是100%乙腈溶液。因為即使樣品*溶解在了100%的乙腈溶液中,隨著流動相的加入,可能乙腈溶液被稀釋
導致樣品析出。輕則造成上述a,b兩種故障,重則向c,d發(fā)展。zui嚴重則發(fā)生f的故障,那就只能更換色譜柱了。
然而,混合樣品的情況下可能發(fā)生g的故障。判斷樣品會不會在色譜柱內(nèi)部析出可以通過以下步驟。減少樣品較易溶解的
溶劑量,然后試著增加注入量。也就是說,如果是要求注入在100%乙腈溶液中溶解的樣品20ul,可以試著注入在20%乙腈
中溶解的樣品125ul。如果上述的故障消失了,則說明使用100%乙腈作為溶劑是不合適的,樣品會在色譜柱內(nèi)析出。

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