液相色譜柱后衍生法測(cè)定維生素B2

——天津蘭博方法開發(fā)實(shí)驗(yàn)室

維生素B2又稱核黃素，是維持機(jī)體正常結(jié)構(gòu)與功能的必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有多種生理功能。維生素B2的缺乏可出現(xiàn)眼角炎、舌炎等一些癥狀，引起脂肪酸代謝障礙等。關(guān)于維生素B2的測(cè)定有很多方法，傳統(tǒng)的有微生物法、熒光法，分光光度法，現(xiàn)代分析方法有電化學(xué)法、化學(xué)發(fā)光法、毛細(xì)管電泳法以及液相色譜法，其中液相色譜法因其前處理簡(jiǎn)單，樣品用量少、分析速度快而逐漸成為維生素B2的常用檢測(cè)方法。本文采用蘭博液相色譜系統(tǒng)，建立了檢測(cè)維生素B2的液相色譜方法，結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、結(jié)果令人滿意。

1 測(cè)試條件

1.1 儀器

分析型液相色譜儀（HPLC），由AS1000自動(dòng)進(jìn)樣器，Lablliance Series 高壓泵、DAD檢測(cè)器和Lablliance色譜工作站組成，配一支C18 Kromasil 色譜柱( 4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱溫箱。

美國(guó)蘭博LC6500

1.2試劑

維生素B2對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），乙腈（色譜純），水為屈臣氏蒸餾水，其他試劑為分析純。

1.3對(duì)照品溶液配制

精密稱取維生素B2對(duì)照品10 mg，置1000 mL容量瓶中，加入混合溶液（冰醋酸0.5 mL與4%氫氧化鈉溶液3 mL，加水至100）適量，振搖使溶解，用上述混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為10 ug/mL維生素B2溶液，作為對(duì)照品溶液，備用。

1.4色譜條件：

色譜柱：Kromasil (4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；

流動(dòng)相：乙腈-0.008mol/L己烷磺酸鈉-三乙胺-冰乙酸（12:87:0.25:0.75）；

柱溫：室溫；

流速：1.0 mL/min；

檢測(cè)波長(zhǎng)：267 nm；

進(jìn)樣量：20 uL。

2測(cè)試結(jié)果：

2.1 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

在200～450 nm對(duì)維生素B2對(duì)照品溶液進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，結(jié)果表明，在267、375、444 nm處有zui大吸收，zui后選擇在267 nm處對(duì)維生素B2進(jìn)行測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖如圖1所示。

圖1 維生素B2對(duì)照品溶液的液相色譜圖

2.2線性關(guān)系、方法檢出限考察

以對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣5、10、20、30、40 uL，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為： Y = 21.7962 X + 39532，r = 0.9997。表明維生素B2進(jìn)樣量在0.05～0.40 ug濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

對(duì)維生素B2對(duì)照品溶液連續(xù)測(cè)定6次，以保留時(shí)間和峰面積的RSD考察儀器的精密度，褪黑素的保留時(shí)間和峰面積的RSD分別為0.48%和 1.32%。

3結(jié)論

本文采用液相色譜對(duì)維生素B2進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示本方法方便、準(zhǔn)確、精密度高，重現(xiàn)性好，可以滿足日常分析需要。