純化線粒體磷氧比(ADP/O)定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
純化線粒體磷氧比(ADP/O)定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
主要用途
純化線粒體磷氧比(ADP/O)定量檢測試劑是一種旨在通過極譜法檢測系統(tǒng)(polarographic system)測定新鮮活體線粒體在已知濃度ADP存在(III態(tài)呼吸)的情況下氧濃度的降低,來分析磷氧比(P:O ratio),以評價線粒體呼吸鏈和氧化磷酸化偶聯(lián)程度,即能量轉(zhuǎn)化效率的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。可以被用于線粒體生理功能和藥物作用機制等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡易,活體檢測,性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
線粒體是細胞呼吸鏈和氧化磷酸化的中心。電子傳遞和ATP合成通過質(zhì)子梯度偶聯(lián)成一體,即線粒體的呼吸耗氧偶聯(lián)著ADP與Pi合成ATP的磷酸化反應(yīng)。線粒體每吸收一克原子氧的同時,生長ATP(ADP磷酸化)的克分子數(shù)的比值,為ADP/O值。線粒體的磷氧比直接表征線粒體呼吸耗氧和ATP合成的關(guān)系。正常線粒體的ADP/O(P/O)為1.5:磷氧比降低意味著線粒體解偶聯(lián);磷氧比增高意味著線粒體偶聯(lián)良好。其zui大值為3.3。
產(chǎn)品內(nèi)容
介質(zhì)液(Reagent A) 50毫升
底物液(Reagent B) 800微升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存在-20℃冰箱里,有效保證6月
用戶自備
CLARK氧電極儀:用于測定溶解氧濃度
實驗步驟
實驗開始前,制備好新鮮的線粒體置于冰槽里備用;同時將-20℃冰箱里的試劑融化,并預(yù)熱氧電極儀到25℃。然后進行下列操作。
- 加入2.5毫升 介質(zhì)液(Reagent A)到反應(yīng)玻璃槽
- 使用微型磁力子攪拌,充分混勻
- 密封反應(yīng)槽
- 開始記錄氧濃度:起始飽和氧濃度值為0.240微摩爾分子氧/毫升(25℃)
- 持續(xù)記錄1分鐘后,注射加入20微升待測的線粒體(總量2毫克)(注意:氧濃度可能瞬時變化)
- 持續(xù)記錄1分鐘后,注射加入20微升 底物液(Reagent B)(注意:氧濃度在10秒鐘內(nèi)開始下滑;參見注意事項9)
- 持續(xù)記錄直至出現(xiàn)線性下行斜線出現(xiàn)拐點
- 繼續(xù)注射加入20微升 底物液(Reagent B)(注意:氧濃度在10秒鐘內(nèi)開始下滑)
- 持續(xù)記錄直至出現(xiàn)線性下行斜線出現(xiàn)拐點
- 測算氧濃度降低值(微摩爾/毫升):
【(*次加入底物前的氧濃度-*次下行斜線拐點時的氧濃度) +(第二次加入底物前的氧濃度-第二次下行斜線拐點時的氧濃度)】÷2(實驗次數(shù))
- 計算ADP/O:
0.2微摩爾(ADP濃度)÷【氧濃度降低值(微摩爾/毫升)X 2.5(反應(yīng)體系容量;毫升)X 2 (氧分子數(shù))】
注意事項
- 本產(chǎn)品為20次操作
- 操作時,須戴手套
- 確保反應(yīng)玻璃槽潔凈,密閉,以免氧氣流入
- 線粒體樣品須新鮮制備,建議不要凍存;制備的線粒體膜須完整,非常重要;建議使用 線粒體分離試劑盒-GMS10006.1
- 注射加入反應(yīng)槽時,避免氣泡和空氣注入
- 避免乙醇污染;乙醇增加氧濃度;如果底物或抑制劑須使用乙醇溶解,則加注10微升
- 保持反應(yīng)槽溫度恒定,溫度降低,氧濃度升高
- 反應(yīng)液充分混勻,和環(huán)境氧保持平衡
- 加注 底物液(Reagent B)前,須充分凍融和混勻
- 嚴格按照規(guī)定加注試劑,切莫增加加注試劑容量
- 氧濃度百分值轉(zhuǎn)換為微摩爾/毫升:
公式=【測定值(百分值)÷20.9%(環(huán)境標準氧百分值)】X 0.237(系數(shù);微摩爾/毫升)
- 本公司提供系列線粒體檢測試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標準
- 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
- 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感
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