MB80042.2 v.A

 冰凍切片組織琥珀酸脫氫酶活性染色試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

 冰凍切片組織琥珀酸脫氫酶（SDH）活性染色試劑是一種旨在使用合成電子受體四氮唑蘭染料，通過反應系統的作用，組織樣本中酶活性部位呈現出藍黑色沉淀現象的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種動物組織冰凍切片樣品琥珀酸脫氫酶的活性檢測。用于衰老、能量代謝、蛋白組學、病理生理學、神經病變等研究。產品不含污染性蛋白酶，嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，反應優化，顯色清晰。

技術背景

琥珀酸脫氫酶（succinnate dehydrogenase；SDH；EC 1.3.99.1）是三羧酸循環（tricarboxylic acid cycle；TCA）或Krebs循環中與細胞線粒體膜相關的重要元素，位于線粒體內膜，參與細胞呼吸鏈。琥珀酸脫氫酶由27kd和70kd兩個單體組成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反應，產生延胡索酸（furmarate），通過黃素腺嘌呤二核苷酸（Flavin Adenine Dinucleotide；FAD）傳遞電子。基于琥珀酸脫氫酶的反應原理，使用人工電子受體染料硝基藍四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT），接受來自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸（Reduced flavin Adenine Dinucleotide；FADH₂）的電子，而被還原，產生不溶性藍色或藍黑色甲暨色素。據此證明組織細胞琥珀酸脫氫酶的活性。

產品內容

 清理液（Reagent A）  100毫升

 染色液（Reagent B）   10毫升

 反應液（Reagent C）    1毫升

 固著液（Reagent D）   10毫升

產品說明書    1份

保存方式

保存 染色液（Reagent B）和 反應液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

培養箱：用于反應孵育

中性樹脂：用于切片封片

光學顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實驗步驟

染色開始前，將－20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化；移取900微升 染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入100微升 反應液（Reagent C），混勻后，標記為 染色工作液，置于冰槽里，避免光照。然后進行下列操作。

• 取出待測的10微米厚的冰凍組織切片 
• 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升  染色工作液，鋪滿整個切片樣品表面
• 放進37℃培養箱里孵育10分鐘，避免光照
• 小心移去切片上的 染色工作液
• 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟7至8二次
• 小心加上200微升 固著液（Reagent D）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育15分鐘
• 小心移去切片上的 固著液（Reagent D）
• 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟13至14二次
• 放上蓋玻片或封片（中性樹脂）
• 即刻在光學顯微鏡下觀察和計數：表達琥珀酸脫氫酶活性的組織細胞為陽性組織細胞，呈現藍黑色。

注意事項

• 本產品為50次操作
• 操作時，須戴手套
•  反應液（Reagent C）避免反復凍融
• 陰性對照時，GENMEN染色工作液不含有 反應液（Reagent C）
• 可以使用50毫摩爾丙二酸鈉（Sodium malonate）作為抑制劑
• 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
• 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
• 整個操作，在避光狀態下進行
• 染色孵育時間，根據樣品和酶活性強弱調整，通常為5至30分鐘
• 染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察
• 樣品染色后保存，避免光照
• 本公司提供系列組織細胞酶活性染色試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰