用于elisa檢測的樣本有很多種類型,如血清、血漿、尿液、細胞培育上清或安排勻漿液等,下面介紹下不同類型的檢測樣本前期的處理辦法。
1、血清
血清是zui常用于elisa檢測的一類樣本,處理也比較簡單。用無熱原、無內毒素的試管或離心管搜集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜,使血清分出。(將試管或離心管歪斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的分出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,細心搜集上清。主張將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融。一起必須得留意,在采血的過程中應防止溶血,以及防止細菌污染,防止形成試驗成果的不。
2、血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管搜集血液標本,標本搜集后30min內4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融。防止運用溶血或高血脂的標本。
3、細胞培育上清
取細胞培育上清到離心管,1000×g離心20min,除掉細胞碎片及雜質,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融。
4、尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min,取上清即可檢測。為了保證檢測的性,保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內檢測;4℃保存的樣本應在1周內進行檢測。
5、細胞裂解液
1.吸去培育板內的培育基,用胰酶消化細胞,加適量培育基將細胞從培育板上吹下來。懸浮細胞可省掉。
2.搜集細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培育基,用預冷的pbs潤洗3次。
3.參加適量的預冷pbs或細胞裂解液(臨用前參加蛋白酶抑制劑)重懸細胞。一般6孔板一個孔的細胞量需求150~250μl pbs重懸。
4.將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫凍結樣品,重復凍融幾回,使細胞充沛裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以到達裂解的意圖。
5.4℃ 10000×g 離心10min,除掉細胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融。
6、安排勻漿液
1.將安排樣本用pbs (0.01m, ph 7.4) 沖刷,洗去安排外表殘留的血液或雜質。
2.將安排塊稱重,記載后剪碎,碎塊應盡量小,便于勻漿得更充沛
3.將安排按必定的份額參加預冷的pbs(臨用前參加蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿份額為安排分量:pbs體積=1:9,勻漿時置于冰上或冰浴中。
4.汲取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融。
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