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ELISA試劑盒操作過程:
1.規范品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設規范品孔10孔,在、第二孔平別離加規范品100μl,然后在、第二孔中加規范品稀釋液50μl,混勻;然后從孔、第二孔中各取100μl別離加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔別離加規范品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl別離加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔平別離加規范品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl別離加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔平別離加規范品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔平別離取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔別離加規范品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度別離為24ng/L,16ng/L ,8ng/L,4ng/L,2ng/L)。
2.加樣:別離設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其他各步操作一樣)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動混勻。
3.ELISA試劑盒溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗刷液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5.洗刷:當心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔參加酶標試劑50μl,空白孔在外。
7.溫育:操作同3。
8.洗刷:操作同5。
9.顯色:每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震動混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.停止:每孔加停止液50μl,停止反響(此刻藍色立轉)。
11.ELISA試劑盒測定:以空白空調零,450nm波長依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加停止液后15分鐘以內進行。
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