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大鼠平滑肌細胞的另一種培養方法

來源:上海子實生物科技有限公司   2017年07月04日 09:25  

器械
顯微器械:眼科剪一把,直彎眼科鑷各一把,細結鑷一把,手術刀一把,針頭諾干
殺老鼠器械:手術剪一把,大鑷子一把,彎眼科鑷一把,組織鉗一把,50ml燒杯一個(錫紙包好)
另外:10ml離心管兩個,培養皿兩個,10ml的瓶子三個,小濾器兩個,硅膠板一塊,培養瓶蓋子諾干
貳。試劑
D-HANKS液250ml,雙抗2ml(青霉素16萬U/ml鏈霉素15萬U/ml)。FBS和含20%FBS的DMEM
叁。步驟
1. 取大鼠,稱重,水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉
2. 綁好大鼠,先剪開腹腔,剪斷腹部大動脈放血,后剪開胸腔,取肺
3. 放入燒杯,后移入超凈臺,置于冰盒上。以后的操作皆在冰盒上操作
4. 倒入已加雙抗的D-HANKS,清洗肺部,扯掉食管,剪掉心臟
5. 用針頭將肺固定在硅膠板上,硅膠板置于培養皿里
6. 用鑷子將肺的內外膜除去,只剩下平滑肌
7. 用眼科剪將肺部剪成1-2mm的小碎塊
8。在培養瓶中加入一到兩滴的FBS,輕搖培養瓶,使血清鋪滿瓶底。
9。用眼科剪將碎塊放進瓶中,后用滴管將碎塊在瓶里鋪均勻。
10。將瓶底朝上,放入培養箱中
11。四個小時后,將瓶子翻回
這樣處理后,一般五天內不用看它,第六天開始,可以加入含20%FBS的DMEM
兩種方法比較,貼壁法的優點在于時間較少,所用試劑少,不用出去離心,較少污染機會。
但據我們實驗室的經驗,貼壁法較消化法爬出細胞的時間較長,且細胞不大純,活性較差。戰友們可以根據自己的需要選折

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