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專家告訴你制備色譜的技術與操作

來源:天津市蘭博實驗儀器設備有限公司   2017年01月13日 13:39  
  有些搞分析色譜的朋友,對制備色譜這個名詞比較陌生。其實,在化學化工醫藥等廣泛采用的層析法以及薄層色譜就是zui為典型的制備色譜。下面對制備色譜中的一些常用概念做一下介紹。
  1、分析色譜的目的,是分析出混合物中一個純物質的含量。制備色譜的目的,是從混合物中得到純物質。為了加快分離的時間與提高分離的效率,制備色譜的的進樣品量很大,導致制備色譜柱子的分離負荷的相應加大,也就必須加大色譜柱填料,增大制備色譜的直徑和長度,使用的相對多的流動相。然而,當色譜柱上樣品負載加大的時候,往往導致柱效急劇下降而得不到純的產品。制備色譜,要解決容量與柱子效果之間的矛盾,對重現性也要考慮。從經濟上來說。制備色譜要爭取少用填料,少用溶劑,要盡可能多的得到產品。
  2、樣品的前處理:制備色譜柱子由于處理的樣品多,比分析柱子更容易受污染,所以,必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過濾、結晶、固相萃取等簡單的分離方法,如果用得上,而且還不是很麻煩,就要盡可能多的采用以去掉雜質。
  3、制備色譜柱的材質及其特點。下面介紹一下,制備色譜柱常用的材質及其特點。各種規格的玻璃柱子在實驗室里頭很容易得到,而且價格低廉,但玻璃柱子致命的弱點是它能承受的壓力很小,且非常容易破碎。當由于壓力太小而導致流動相流速很慢的時候,高位液面或加高壓空氣采用是一個簡單的解決辦法。在底下加真空,也能在一定程度上解決這個問題。
  不銹鋼柱子具有良好的耐腐蝕、抗壓力性能,但其價格相對很貴。如果,只有很小的分離任務且經費也允許,市面上直徑為1cm的小型制備柱就是。有機玻璃柱子也能抗壓力耐腐蝕,相對不銹鋼柱子而言,它是半透明的,可以看到液體的運行狀態,對有色的物質其特點就更為突出。
  4、制備色譜固定相的選擇:硅膠、鍵合固定相、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。有不少文獻報道,對填料可以進行一下處理提高了分離效果,如,對硅膠進行的硝酸銀處理。
  5、裝柱方法的選擇,根據固定相顆粒度和柱子的尺寸,采用不同的裝柱方法,往往裝填越好分離效果越好。裝柱效果跟填料的顆粒度關系很大,顆粒度的減少會導致裝柱的難度。一般來說,顆粒直徑小于20-30um的固定相采用濕法裝填。所謂“敲擊-裝填”技術適用于顆粒直徑大于25um的固定相。濕法的目的是迫使相對稀松的固定相懸漿以高速裝入色譜柱子,從而減少空隙的形成。然而,當柱直徑大于20mm,所加壓力為30-40bar時,高壓懸漿裝填技術就變得十分復雜。為將小顆粒固定相裝入更大得制備型色譜柱,可采用柱長壓縮技術。這種方法,先將固定相懸漿裝入柱中加壓,利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩種:徑向壓縮和軸向壓縮。濕法裝柱需要一定的設備,在柱子填完后,應用有柱效的測量,對柱效低的柱子應該重填。
  6、流動相的選擇:除了和分析色譜同樣的考慮外,在選用流動相時,要考慮制備色譜分離后面加有旋轉蒸發等二次分離操作。一般來說,不宜采用高毒性溶劑,對多元溶劑要盡可能的少用。如果產品中含有大量溶劑,溶劑的純度也要考慮在其中。
  7、加樣的方法:可以采用以下方法之一進樣。-用注射器進樣-用旋轉閥進樣-通過六通閥進樣-通過主泵進樣-通過輔泵進樣-固體上樣
  8、泵的選用:生產制備色譜泵的廠商很多。根據有無脈沖、能承受的zui大壓力、控制的精度、售后服務等來選擇泵。
  9、檢測器的選用:一般的分析池的zui大允許流速僅為5mL/min或者10mL/min。而專門的制備池的zui大允許流速可為150mL/min。有時,采用旁路分離管,將少量流體導入分析池進行檢測,是一個不錯的辦法,但其濃度的誤差會相對較大。
  10、組分保留時間的估計,用分析柱子在同等色譜條件下測定保留時間后,按照單一組分的線流速一定,通過計算可以知道組分的大致保留時間區域。分析譜圖的峰形狀,對確定保留時間也有很大的參考價值。
  11、產品的收集,手工餾分收集費時費力,自動餾分收集器有很大的方便。許多實驗室和工廠都采用了餾分收集器。
  12、超載、邊緣切割、中心切割、放大技術與非線性效用,在制備色譜中,因為沒有必要達到分析色譜那樣的分離度,可以在一定范圍內大大加大進樣的濃度和體積。在做分離的時候,也有一些分析制備色譜的時候,不能用到的技巧。因為篇幅關系,不在這里敘述。

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