ELISA試劑盒是以免疫學反響為根底，將抗原、牽9體的特異性反響與酶對底物的催化效果相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。因為抗原、抗體的反響在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每參加一種試劑孵育后，可經過洗刷除掉剩余的游離反響物，然后確保試驗成果的特異性與穩定性。在實際應用中，經過不一樣的設計，詳細的辦法過程可有多種。即:用于檢查抗體的間接法（圖a）、用于檢查抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢查小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。對比常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
二.操作過程
ELISA試劑盒辦法一用于檢查不知道抗原的雙抗體夾心法：
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml，4℃。次日，棄去孔內溶液，用洗刷緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗刷，下同）。
2.加樣：加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中，置37℃孵育1小時。然后洗刷。（一起做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3.加酶標抗體：于各反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗刷。
4.加底物液顯色：于各反響孔中參加臨時制造的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5.停止反響：于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml。
6.成果斷定：可于白色布景上，直接用肉眼調查成果：反響孔內色彩越深，陽性程度越強，陰性反響為無色或極淺，根據所呈色彩的深淺，以“+”、“-”號表明。也可測O·D值：在ELISA檢查儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔O·D值，若大于規則的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
辦法二用于檢查不知道抗體的間接法：
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4。次日洗刷3次。加必定稀釋的待檢樣品（不知道抗體）0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃孵育1小時,洗刷。（一起做空白、陰性及陽性孔對照）于反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗刷,zui后一遍用DDW洗刷。其他過程同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
三.留意事項
1.正式試驗時，應別離以陽性對照與陰性對照操控試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以確保試驗成果的性。有時本底較高，說明有非特異性反響，可采用羊血清、兔血清或BSA等關閉。
2.在ELISA試劑盒中，進行各項試驗條件的挑選是很主要的，其中包含:
（1）固相載體的挑選：很多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在運用前均可進行挑選：用等量抗原包被，在同一試驗條件下進行反響，調查其顯色反響是否均一性，據此判明其吸附功能是否杰出。
（2）包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體外表時，請求純度要好,吸附時一般請求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時刻及其蛋白量也有必定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不一樣的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相一起，調查陽性標本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。關于大都蛋白質來說一般為1～10μg／ml。
（3）酶符號抗體作業濃度的挑選：首先用直接ELISA法進行開始效價的滴定（見酶符號抗體部份）。然后再固定其它條件或采納“方陣法”（包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體別離為不一樣的稀釋度）在正式試驗體系里地滴定其作業濃度。
（4）酶的底物及供氫體的挑選：對供氫體的挑選請求是價廉、安全、有明顯地顯色反響，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌效果，應留意防護。有條件者應運用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是現在較為滿足的供氫體。底物效果一段時刻后，應參加強酸或強堿以停止反響。一般底物效果時刻，以10-30分鐘為宜。底物運用液必須新鮮制造，尤其是H2O2在臨用前參加。