關于間接ELISA試劑盒標本通常都要進行稀釋，如果加樣不準就會構成差錯，尤其當稀釋倍數大時，很小的差錯，會致使較大的相對差錯，使陰性（或弱陽性）標本呈陽性（或陰性）。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留意不行濺出，不行發作氣泡。現在，大有些血站都已運用全自動酶免加樣體系處理標本，可較好地防止以上差錯。
在ELISA中的洗刷是確保得到可重復成果的關健一步，應致使操作者注重。無論是手工操作仍是機器操作，得出不的成果常與不的洗刷有關，ELISA即是靠洗刷來到達分離游離和的酶符號物的意圖。經過洗刷以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體的物質，以及在反響進程中非特異性吸附于固相載體的攪擾物質。
每種ELISA試劑盒都有其*反響形式，其間溫度和溫育時間操控是重要要素。因孵育溫度高，反響時間長，會構成整板本底高，陽性率高。溫育通常用濕盒或水浴，ELISA試劑盒反響板不宜疊放，以確保各板溫度都能敏捷平衡，為防止蒸騰，板上應加蓋。
作為記載測定成果的儀器，酶標儀的功能安穩與否，決議成果的牢靠度。首要酶標儀應定時進行養護，對濾光片要定時校對；其次酶標儀波長設置要，*運用雙波長，一個檢查波長，一個參比波長，以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度區別構成的光攪擾。此外，在用酶標儀讀數時*先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標儀功能有所不同，運用中應具體閱讀說明書
綜上所述，盡管現在上以及我國有了有些規范血清或參比血清（血清盤），可是酶聯免疫吸附技能現在在技能上沒有做到規范化。受方法學及技能條件的約束，在酶聯免疫吸附測定中有時不行防止的會呈現必定的非特異性，ELISA試劑盒咱們可以經過以上辦法把非特異性顯色降至zui低限底，然后提高檢查的特異性，并得到更、牢靠的試驗成果。
酶聯免疫吸附試驗（ELISA）自面世以來，以其敏感性高，特異性強，操作簡潔、安全，創始了免疫學確診的確診方面得到了廣泛的使用。可是ELISA試劑盒在它的研討、出產及運用中常常會碰到非特異性顯色疑問，ELISA試劑盒特異性、查驗標本中含酶符號物的攪擾物，操作不當等要素都會致使這么的成果。本文就在試驗進程中發作的一些原因及怎么采納一些辦法，消除非特異性顯色作以分析。
風濕因子（RF）、黃疸等，類風濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的自身抗體，大都為IgM類，能充當抗原成分與固相及酶標抗體反響，然后呈現非特異性顯色。
黃疸血標本中常富含內源性過氧化物酶，如用辣根過氧化物酶為符號物，就有也許發作非特異性顯色。
常因樣品收集、儲存、處理不當構成如樣品溶血，被細菌污染，標本凝聚不全等。溶血標本，紅細胞溶解決裂，釋放出血紅素構成，而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標本也許會增加非特異性顯色。如有細菌污染，菌體中也許富含內源性HRP（辣根過氧化酶），有國內報導酶免HBsAg試劑檢查溶血標本時可構成假陽性。如在冰箱中保留過久，其間的IgG可發作聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。因而，血標本在收集處理時應當心，在冰箱中保留不易過久。
ELISA試劑盒標本凝聚不全時，血清中會殘留有些纖維蛋白原，也易構成假陽性。