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人胚胎心肌組織來(lái)源細(xì)胞實(shí)驗(yàn)原理

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人胚胎心肌組織來(lái)源細(xì)胞實(shí)驗(yàn)原理:
1收到細(xì)胞后當(dāng)天換液,全部更換成客戶自己的新鮮培養(yǎng)基,放進(jìn)培養(yǎng)箱,第二天再消化。
2邊觀察邊消化,CCC-HHM-2人胚胎心肌組織來(lái)源細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞的形態(tài),終止消化時(shí)間,采取以半分鐘間隔吹打細(xì)胞邊緣,如可吹打下來(lái),即終止消化。客戶摸索比較好的消化時(shí)間。
3隨細(xì)胞有一份細(xì)胞操作說(shuō)明書(shū),請(qǐng)客戶仔細(xì)查看。
4記得加1%雙抗,降低被污染的概率。另外盡早凍存留種,以備后用。
5售后時(shí)間為一周,于細(xì)胞本身的質(zhì)量問(wèn)題,而因乙方自己不當(dāng)操作(不規(guī)范操作,消化過(guò)度,不加雙抗導(dǎo)致的污染等)導(dǎo)致的細(xì)胞問(wèn)題不在售后范疇。
6收到細(xì)胞后,如細(xì)胞狀態(tài)不佳,或培養(yǎng)中遇到問(wèn)題,煩請(qǐng)當(dāng)天盡快,以便處理。當(dāng)天及時(shí)反饋細(xì)胞情況和細(xì)胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù),請(qǐng)您務(wù)必重視。
7剛收到細(xì)胞時(shí),胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天,利于細(xì)胞盡快恢復(fù)狀態(tài),細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,再調(diào)回10%即可。
IDMEM:適合細(xì)胞密度低,生長(zhǎng)困難的細(xì)胞。如雜交細(xì)胞的篩選,DNA轉(zhuǎn)染后轉(zhuǎn)化細(xì)胞的篩選培養(yǎng)。
RPM1640:應(yīng)用zui廣泛的培養(yǎng)基之一。懸浮細(xì)胞培養(yǎng),主要針對(duì)淋巴細(xì)胞,也適合其他細(xì)胞。
199、109培養(yǎng)基:成分齊全,培養(yǎng)效果較好。
F10培養(yǎng)基:適合小鼠及人類二倍體細(xì)胞培養(yǎng)。
F12培養(yǎng)基:CCC-HHM-2人胚胎心肌組織來(lái)源細(xì)胞適合單細(xì)胞分離培養(yǎng)及無(wú)血清培養(yǎng)。
McCoy’s培養(yǎng)基:特別適合原代細(xì)胞及較難培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)。
人胚胎心肌組織來(lái)源細(xì)胞培養(yǎng)條件:    詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
        【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次
        【凍存條件】    詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
        【主要文獻(xiàn)】    請(qǐng)具體查閱相關(guān)發(fā)表文章
實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)分享:
啟蒙老師的重要性:一般進(jìn)實(shí)驗(yàn)室都有師兄師姐帶著做,他們就是你做細(xì)胞的啟蒙老師。他們的操作手法、細(xì)節(jié)、理論講解就成了你操作的準(zhǔn)則,如營(yíng)養(yǎng)液、細(xì)胞瓶的擺放位置;滅菌處理程序;開(kāi)蓋手法;細(xì)胞吹打手法等等。要學(xué)會(huì)他們的正確操作,在*次的時(shí)候就要重視。
像養(yǎng)孩子一樣養(yǎng)細(xì)胞:細(xì)胞真的很脆弱,每天都去看看它,以防止出現(xiàn)培養(yǎng)箱缺水、缺二氧化碳、停電、溫度不夠等異常現(xiàn)象,也好及時(shí)解決這些意外,避免重復(fù)實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的更大痛苦。
好細(xì)胞要及時(shí)保種:細(xì)胞要分批傳代,這樣即使有一批出了問(wèn)題,還有一批備用的。像后者一般人可能不容易做到。但這是我血的教訓(xùn),有一次細(xì)胞污染了,全軍覆沒(méi)。當(dāng)時(shí)可后悔沒(méi)有保種。
每種細(xì)胞都有自己的特性,要區(qū)別對(duì)待:細(xì)胞跟人一樣,不同的細(xì)胞,培養(yǎng)特性是不一樣的。培養(yǎng)過(guò)程中要細(xì)細(xì)體會(huì)。不同細(xì)胞株使用不同的培養(yǎng)基和血清。
如我養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞很活躍,喜歡熱鬧,2~3天就好多人口,而且不太愛(ài)吃喝,真是養(yǎng)的孩子了。內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞性格相近,不過(guò)它很不講衛(wèi)生,也很邋遢,里面有很多分泌屋,要經(jīng)常換洗才行。RAW264.7細(xì)胞也很開(kāi)朗,而且很能吃,要經(jīng)常喂它,頭疼的是細(xì)胞很容易活化,培養(yǎng)它的瓶子和環(huán)境沒(méi)有內(nèi)毒素才好。
玻璃器皿的清洗。對(duì)于玻璃器皿(細(xì)胞瓶、裝營(yíng)養(yǎng)液的瓶子、小青霉素瓶等)要先用洗衣粉刷干凈(注意死角),然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上,CCC-HHM-2人胚胎心肌組織來(lái)源細(xì)胞之后用清水沖洗 10 遍,除去殘留酸液。瓶子之類,沖洗過(guò)程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡24h。晾干后包扎,160℃干烤2h待用。
試劑配置。細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意pH值的調(diào)節(jié)。
無(wú)菌檢驗(yàn)。主要采用過(guò)濾除菌:如胰酶、抗生素、G-418溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等。有些可以采用高壓滅菌:如PBS、D-Hank's等。
人胚胎心肌組織來(lái)源細(xì)胞試劑分裝保存:包括營(yíng)養(yǎng)液、胰酶、血清等。

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