引言 對羥基苯甲酸酯指的是一 組對羥基苯甲酸酯化合物， 這類化合物廣泛用做多種 日常產(chǎn)品的抗菌防腐劑，如 化妝品、個人護理產(chǎn)品、食品和藥物制劑 1-5。它們因具有廣譜活性，以及化學(xué) 和熱穩(wěn)定性 1-3，因此被廣泛使用。對羥基苯甲酸酯可以單獨使用，也可以與其 他對羥基苯甲酸酯組合使用 1。近期研究發(fā)現(xiàn)，部分對羥基苯甲酸酯表現(xiàn)出微 弱的內(nèi)分泌干擾作用，可增加罹患乳腺癌的風(fēng)險，同時還存在其他影響。由于 對羥基苯甲酸酯能夠被皮膚吸收而不被酯酶分解，這些影響可能會進一步被加 劇 1,2,4,5。
由于這些潛在的健康風(fēng)險，歐洲國家已經(jīng)限制在化妝品和個 人護理產(chǎn)品的生產(chǎn)中使用對羥基苯甲酸酯。歐盟委員會條例 已經(jīng)禁止使用幾種對羥基苯甲酸酯，包括對羥基苯甲酸異丙 酯、對羥基苯甲酸異丁酯、對羥基苯甲酸苯酯、對羥基苯甲 酸芐酯和對羥基苯甲酸戊酯，并針對其他對羥基苯甲酸酯制 定了限制措施 6。對羥基苯甲酸酯，屬于“4-羥基苯甲酸及其鹽和酯"的范疇。 根據(jù)這一規(guī)定，單一酯類的最大濃度為 0.4 %（w/w），酯混 合物的最大濃度為 0.8 %（w/w）6。對羥基苯甲酸丁酯和對 羥基苯甲酸丙酯被視為對消費者而言較為安全，只要其在化 妝品制成品中的各自濃度加和不超過 0.14 %（w/w）即可 6。 2-苯氧乙醇是另一種具有廣譜抗菌活性的防腐劑，廣泛被用 于化妝品和個人護理產(chǎn)品 7。2-苯氧乙醇可以單獨使用，也可 以與對羥基苯甲酸酯結(jié)合使用。歐洲消費者安全科學(xué)委員會 認為，當(dāng) 2-苯氧乙醇的濃度不超過 1.0 %（w/w）時，對消費 者（包括兒童）是安全的 7,8。
在美國，雖然《聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法》（FD&C 法）對 化妝品中的防腐劑沒有具體規(guī)定，但對其處理方式與其他化 妝品成分相同，即銷售摻假或標錯的化妝品屬于違法行為 9。 如果按照標簽上的說明正確使用化妝品，那該化妝品對消費 者必須是安全的。
對于生產(chǎn)含有對羥基苯甲酸酯的化妝品制造商而言，開發(fā) 穩(wěn)健的分析方法以確保產(chǎn)品質(zhì)量的一致性使其持續(xù)符合法 規(guī)及安全要求是極其重要的。本文展示了一種快速、穩(wěn)妥且高靈敏的液相色譜方法，用于對八種不同市售化妝品和個 人護理產(chǎn)品中的 2-苯氧乙醇和七種常用的對羥基苯甲酸酯 進行分析。這八種防腐劑的結(jié)構(gòu)如圖 1 所示。
實驗部分 硬件/軟件 使用珀金埃爾默 LC 300 HPLC 系統(tǒng)進行色譜分離，該系統(tǒng) 由 LC 300 HPLC 泵和配有集成柱溫箱的 LC 300 HPLC 自 動進樣器組成。通過 LC 300 多波長紫外/可見光檢測器 （MWD）進行檢測。儀器控制、檢測分析和數(shù)據(jù)處理由 SimplicityChrom™ CDS 軟件平臺完成。
色譜圖前半部分使用波長程序在 220 nm 下進行檢測，以 達到對 2-苯氧乙醇的最佳靈敏度，然后在 1.516 分鐘時 切換至 254 nm 作為剩余色譜分析的檢測波長。
溶劑、標準品和樣品 所有使用的溶劑和稀釋劑均為 HPLC 級。除非另有規(guī)定， 標準品和樣品提取液則均采用甲醇進行稀釋配制。 八個標準品購自 Sigma-Aldrich®, Inc. （St. Louis, MO）。 這些標準品包括：2-苯氧乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸異丙酯、 對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸異丁酯和對羥基苯甲酸 芐酯。 將每種標準品分別稱取 10 mg 溶解在 20 mL 甲醇中，分 別制備 500 μg/mL 的單獨化合物標準品儲備液。然后在 10 mL 容量瓶中加入 1 mL 每種標準品儲備液，制備 50 μg/mL 工作液，這也作為等級 10 的校準標準品。選擇甲 醇作為稀釋劑以確保標準品溶解。 通過使用甲醇將工作溶液連續(xù)稀釋至 25、12.5、5、2.5、 1.25、0.5、0.25、0.125 和 0.0625 μg/mL 的濃度水平來制 備其余的校準標樣，以獲得 10 個濃度級別的校準標樣。從當(dāng)?shù)爻匈徺I八款不同的個人護理產(chǎn)品，包括保濕霜、爽膚 水、護手霜、面部保濕乳液、身體乳、沐浴露、標有不含防腐 劑的胡須清潔液和標有不含防腐劑的面霜。 對約 0.1 g 的每個樣品在 50mL 容量瓶中用甲醇超聲提取 15min。然后用 0.45 微米的聚四氟乙烯針頭式過濾器（部件號 02542910）過濾樣品，再進樣 2 μL 進行分析。
實驗結(jié)果和討論 12.5 μg/mL 標準品的色譜圖如圖 2 所示，所有八種分析物的 洗脫時間剛超過 5 分鐘。此方法在所有緊密洗脫的峰之間提供 了色譜分離度。在對羥基苯甲酸異丙酯和對羥基苯甲酸 丙酯兩種異構(gòu)體之間可以獲得 3.0 的分離度，而在通常難以分 離的對羥基苯甲酸異丁酯和對羥基苯甲酸丁酯異構(gòu)體之間可 以獲得 1.8 的分離度。對羥基苯甲酸芐酯（峰 8）與對羥基苯 甲酸丁酯實現(xiàn)基線分離，其分離度為 2.4。
如表 2 所示，每種分析物的檢出限（LOD, S/N > 3:1）和定量限（LOQ, S/N > 10:1）都是由等級 1 校準標準品的平均結(jié)果 （n=6）計算獲得。表 2 還顯示了低濃度（1 μg/ mL）和高濃度（40 μg/mL）下的回收率和準確度。用經(jīng)過檢測將不含任何 對羥基苯甲酸酯的面霜用于回收率研究，低濃度和高濃度下的回收率分別為 97.5 - 100.7% 和 101.1 - 102.4%。該方法還 顯示出較高的準確度，在低濃度和高濃度下的準確度分別為 95.7 - 97.4% 和 99.89 - 99.95%。
基于校準標準品，每個樣品的定量分析結(jié)果在表 3 中顯示。雖然 FDA 不要求在化妝品標簽上列出含量，但他們確實要求準 確標注成分。所有檢測出的分析物均與每個產(chǎn)品的成分清單相符。保濕霜和爽膚水只含有 2-苯氧乙醇，而護手霜、面部保濕 乳液、身體乳和沐浴露都含有一系列對羥基苯甲酸酯混合物。這四個樣品中所含有的量均低于歐盟關(guān)于對羥基苯甲酸酯類總 濃度的限度 0.8 %（w/w）要求。在護手霜和面部保濕乳液中均檢測出對羥基苯甲酸丙酯并對其進行了定量分析，發(fā)現(xiàn)兩個 樣品中對羥基苯甲酸丙酯的含量均低于歐盟規(guī)定的濃度限度 0.14 %（w/w）。同樣，所有檢測出含有 2-苯氧乙醇的樣品的含 量均低于歐盟 1.0 %（w/w）的最大濃度限度。 胡須清潔液和洗面奶的標簽上都聲明不含對羥基苯甲酸酯，而且在分析中確實沒有檢測出對羥基苯甲酸酯。雖然在分析的檢 測波長下檢測到色譜峰，但將洗面奶樣品和等級 7（5 μg/mL）校準標準品的色譜圖疊加（圖 8）可以發(fā)現(xiàn)，這些色譜峰顯 然與任何關(guān)注的分析物的保留時間不一致。
結(jié)論 本研究表明，使用配備 MWD 檢測器的珀金埃爾默 LC 300 HPLC 系統(tǒng)可以對八種常用防腐劑進行快速、穩(wěn)妥的色譜 分離和定量分析。結(jié)果表明，保留時間、重復(fù)性、回收率和 準確度都表現(xiàn)優(yōu)異，并在檢測濃度范圍內(nèi)具有良好的線性。 該方法還可以為所有分析物提供 < 0.1 μg/mL的定量檢測 限 LOQ。 本研究關(guān)注于對八種不同市售個人護理產(chǎn)品的分析，其中 兩種產(chǎn)品標簽聲稱不含對羥基苯甲酸酯。分析結(jié)果與每個 樣品的成分標簽一致，且結(jié)果顯示所有檢測出的防腐劑含 量都低于更嚴格的歐盟委員會法規(guī)規(guī)定的最大濃度限值
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