一、實驗原理
聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯劑在加速劑過硫酸銨或核黃素的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳。
聚丙烯酰胺凝膠具有下列特性：
在一定濃度時，凝膠透明，有彈性，機械性能好；
化學性能穩定，與被分離物不起化學反應，在很多溶劑中不溶；
對PH和溫度變化較穩定；
幾乎無吸附和電滲作用，只要Acr純度高，操作條件一致，則樣品分離重復性好；
樣品不易擴散且用量少；
凝膠孔徑可調節，根據被分離物的相對分子質量選擇合適的濃度，通過改變單體及交聯劑的濃度調節凝膠的孔徑；
分辨率高。
血清蛋白在紙或醋酸纖維薄膜電泳中，只能分離出5~6條區帶，而聚丙烯酰胺電泳卻可分離出數十條區帶，因而，目前PAGE已廣泛用于科研、農、醫及臨床診斷的分析、制備，如蛋白質、酶、核酸、血清蛋白、脂蛋白的分離及病毒、細菌提取液的分離等。
二、實驗用品
（一）器材
（1）夾心式垂直板電泳槽和凝膠模。
（2）直流穩壓電源。
（3）水泵或油泵，真空干燥器。
（4）移液管。
（二）試劑
（1）凝膠貯液：丙烯酰胺30g,甲叉雙丙烯酰胺0.8g,加重蒸水使其溶解后定容至100ml，置棕色試劑瓶中，4℃貯存，一般可保存1個月左右。
（2）分離膠緩沖液：取1mol/L 鹽酸42ml，Tris36.6g,加重蒸水至80ml使其溶解，調PH8.9，然后用重蒸水定容至100ml,置棕色瓶4℃貯存。
（3）濃縮膠緩沖液：取1mol/L 鹽酸48ml，Tris5.98g加重蒸水至80ml，調PH6.7，用重蒸水定容至100ml，置棕色瓶內，4℃貯存。
（4）10%過硫酸胺：稱AP1.0g,加重蒸水至10ml，當天配制。
（5）10% TEMED:取10mlTEMED,加重蒸水至100ml,置棕色瓶內，4℃貯存。
（6）Tris甘氨酸電極緩沖液：稱取Tris6g,甘氨酸28.8g，加蒸餾水至900ml，調PH8.3后，用重蒸水定容至1000ml，置試劑瓶中，4℃貯存，臨用前稀釋10倍。
（7）樣品稀釋液：濃縮膠緩沖液25ml+蔗糖10g+0.05%溴酚藍5ml，用重蒸水定容至100ml，置試劑瓶中，4℃貯存。
（8）染色液：稱取考馬斯亮藍R-250 50mg，溶于10ml冰乙酸，用重蒸水定容至100ml。
（9）脫色液：10%冰醋酸。
（10）保存液：甘油10ml，冰乙酸7ml,加水至100ml.
（三）材料
新鮮血清（無溶血現象）。
三、實驗程序
（一）操作方法
1.安裝夾心式垂直板電泳槽
按說明書即可
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2.配膠
本實驗采用不連續體系，分離膠濃度7.5%，濃縮膠濃度為3%，交聯度均為2.7%。
3.制備凝膠板
將混合后的分離溶液，用細長頭的滴管加至長、短玻璃板間的窄縫內，加膠高度距樣品模板梳齒下緣約1cm。用1ml注射器在凝膠表面沿玻璃板邊緣輕輕加一層重蒸水用于隔絕空氣，使膠面平整。
4.加樣
作為分析用的PAGE加樣量僅需幾微克，2-3µl血清電泳后就能分出幾十條蛋白區帶。取100µl血清用樣品稀釋液稀釋至1ml。用微量進樣器取25µl上述混合液，通過緩沖液，小心地將樣品加到凝膠凹形樣品槽底部，由于樣品溶解液中含有比重較大的蔗糖或甘油，因此樣品溶解液會自動沉降在凝膠表形成樣品層。待所有凹形樣品槽內都加到了樣品，即可開始電泳 。
5.電泳
將直流穩壓電泳儀的正極與下槽連接，負極與上槽連接，接通冷卻水，打開電泳儀開關，開始時將電流調至10mA。待樣品進入分離膠后，將電流調至20~30mA。當溴酚藍染料遷移至距離硅膠框下緣1cm時，將電流調回到零，關電源及冷卻水。旋松固定螺絲，取出硅膠框，用不銹鋼鏟輕輕將玻璃板撬開移去，在膠板一端切除一角作為標記，將膠板移至大培養皿中染色。
6.固定和染色
為防止膠內已分離成分的擴散，需要進行固定，或浸泡在用7%乙酸液或12.5%Trichloroacetic acid配置的染色液中，同時進行固定和染色，本實驗固定和染色同時進行，使染色液沒過膠板，染色1~2h，經常搖動，如水浴加熱，可以縮短染色時間。
7.脫色
用10%乙酸浸泡漂洗數次，直到背景藍色褪去。如用50℃水浴，則可縮短脫色時間。
8.制備凝膠干板
1mm以上的膠板常用凝膠真空器制備干板。如無此儀器可將脫色后的膠板浸泡在保存液中3~4h.制干板時在大培養皿上平放一塊干凈玻璃板，倒少許保存液在玻璃板上，使其均勻涂開，取一張預先用蒸餾水浸透的玻璃紙平鋪在玻璃板上，趕走氣泡，將四邊多余的玻璃紙緊緊貼于玻璃板的背面。平放于桌上自然干燥1-2d，*干后除去玻璃板，即可得到平整、透明的干膠板，此干板可長期保存，便于定量掃描。
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