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液相色譜—電霧式檢測器CAD設(shè)計原理與特點

閱讀:32161      發(fā)布時間:2021-11-16
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CAD 是一款設(shè)計*、技術(shù)先進、靈敏度高、且重現(xiàn)性較好的通用型檢測器,能準確的用于定量或半定量,能檢測到大部分非揮發(fā)性和半揮發(fā)性的化合物。CAD 的兩款型號,見圖 1 所示。CAD 的工作過程(見圖 2 所示):HPLC 洗脫液經(jīng)與霧化器中氮氣碰撞作用而霧化,其中較大的液滴經(jīng)廢液管流出,較小的溶質(zhì) ( 分析物 ) 液滴在室溫下干燥,形成溶質(zhì)顆粒。同時,用于載氣的氮氣分流形成的第二股氮氣流經(jīng)過電暈式裝置 ( 含高壓鉑金絲電極 )形成帶正電荷的氮氣顆粒,與溶質(zhì)顆粒反向相遇時經(jīng)碰撞使溶質(zhì)顆粒帶上正電。為了消除由帶有過多正電荷的氮氣所引起的背景電流,在含溶質(zhì)顆粒的氣流流入靜電檢測計之前,通過一種稱之為離子阱的裝置(帶有低負電壓)使遷移率較大的顆粒(即粒度較小的氮氣顆粒)的電荷中和,而遷移率小的帶電顆粒把它們的電荷轉(zhuǎn)移給一個顆粒收集器,最后用一個高靈敏度的靜電檢測計測出帶電溶質(zhì)的信號電流。由此產(chǎn)生的信號電流與溶質(zhì)(分析物質(zhì))的含量成正比

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CAD檢測器 的分析步驟如下: 

第一步:霧化與干燥HPLC 洗脫液進入 CAD 霧化室,在氮氣作用下,進行霧化去溶劑,使洗脫液中的目標化合物變成顆粒,顆粒量的多少與進入霧化室的目標化合物質(zhì)量有關(guān)。沒有霧化完的大液滴直接進入廢液管,霧化完的超細小液滴進入干燥管,因其粒徑較小,所含溶劑在此被迅速蒸發(fā),干燥后的目標化合物顆粒隨氣流直接進入混合腔。因此,和大多數(shù)基于霧化原理的檢測器一樣,CAD 霧化效率也受流動相中有機相含量的影響顯著,當有機相比例逐漸增加時,霧化效率增加,響應(yīng)值也隨之增加,當有機相比例達到 80% 時,霧化效率趨于穩(wěn)定。 

第二步:使目標顆粒物帶電另一路氮氣經(jīng)過高壓電暈放電針,變成帶正電的氮氣,在碰撞室與干燥的目標化合物顆粒進行正交碰撞后,電荷隨之被轉(zhuǎn)移到目標化合物顆粒表面,因此,如果顆粒物越大,球面積也越大,帶電量也就越多。經(jīng)過碰撞后,帶電顆粒和多余的帶電氮氣離開碰撞室,其中,速度較快的帶電氮氣在遷移途中被低壓離子阱捕集移除,而遷移速度較慢的多電荷目標化合物顆粒則通過后端的離子捕集阱,并撞向一個顆粒物過濾網(wǎng)。 

第三步:檢測帶電目標化合物顆粒物撞擊收集器后,把電荷轉(zhuǎn)移到過濾網(wǎng)上,由此產(chǎn)生的電流將被高靈敏度的靜電計探測到,并被放大輸出至到檢測器,最終產(chǎn)生的信號強度與目標化合物的量成比例。離子肼可以捕集多余帶電氮氣,從而降低背景電流,因此,即使很少的電荷也能被檢測器檢測到,使得 CAD 的檢出限較低,靈敏度較高。同時,由于 CAD 的響應(yīng)不依賴于化合物的結(jié)構(gòu),其對大部分的化合物的響應(yīng)因子也基本一致。蒸發(fā)光散射檢測器由于其散射受到化合物的空間結(jié)構(gòu)的影響,即使是同分異構(gòu)體,同樣的濃度其響應(yīng)值也會出現(xiàn)較大的差異。 


CAD 的主要特點:1)基于該檢測器的設(shè)計原理與結(jié)構(gòu),該檢測器靈敏度高,如在分析葡萄糖、蔗糖和乳糖時,能檢測到 0.5 ng 的柱上樣量;2)響應(yīng)因子一致,不依賴于化合物結(jié)構(gòu),重現(xiàn)性非常好,如對 24 種化合物在相同色譜條件下分別直接進樣 1 µg(不接色譜柱),其響應(yīng)的峰面積的 RSD 值僅為 10.7%;3)動態(tài)檢測范圍寬,達 3-4個數(shù)量級;4)應(yīng)用較廣泛,能分析小分子、大分子化合物,如氨基酸、蛋白、聚合物等;5)使用操作直觀簡單,維護十分簡便,工作流速 0.2-2.0 mL/min,*兼容 UHPLC 超快速分析。CAD 使用注意事項:CAD 由于需要對流動相進行霧化,所以當需要使用酸或鹽來調(diào)節(jié)流動相時要使用揮發(fā)性的酸和鹽,如甲酸、乙酸等,有機鹽建議使用銨鹽;pH 值范圍建議 2-7.5,更高的 pH 值可能會增加背景和噪音值

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