【概述】
近年來，農殘分析已經發展成為一個綜合方法，用于檢測數百種可能的污染物。草藥產品以及茶葉的多殘留方法所面臨的挑戰是，來自世界各地的產品以及干性材料的基質復雜性。在原材料的質量控制過程中，由于大量潛在的農殘污染物，必須考慮到未知的或者未申報的本地植物保護措施。
由于破碎的細胞、樹葉或者果皮中活性成分、香精油和典型高沸點天然聚合物的大量存在，在樣品制備過程中，干樹葉、水果或種子以及其他醫學用途的草藥產品的萃取物極其復雜。萃取樣品的*凈化可能導致目標物的損失。農藥以及其他殘留污染的完整表征，可以利用LC和GC-MS/MS進行，以覆蓋一系列的官能團。
本應用報告說明了利用快速溶劑萃取（ASE）和凝膠滲透色譜法（GPC）進行草藥產品中多農殘分析的方法。所采用檢測和定量系統為TSQ8000GC-MS/MS。將200多種農殘化合物的日常篩選方法應用到一系列不同樣品類型上，從普通紅茶或者鼠尾草，以及茴香種子和醫學用途的藥草，到香料用途的百里香和甘菊。采用ThermoScienti?cTraceFinder定量軟件包進行數據處理和報告。
本次分析的靈敏度要求由法規確定。茶葉和草藥產品中的農殘分析遵從“食品和飼料中農殘分析的方法驗證和質量控制”的健康和消費者事務（SANCO）的歐洲總署法規[1]。
在CodexAlimentarius[2]中引用的這些產品的靈敏度要求，導致了大多數農藥化合物的大殘留水平為0.01mg/kg。
【實驗/設備條件】
分析方法包括樣品處理和采用Thermo Scienti?c TriPlusRSH液體自動進樣器進樣。TRACEGC1310氣相色譜儀配備了即時連接、可編程控溫的PTV進樣系統以及TSQ™8000三重四極桿GC-MS/MS系統。MRM檢測方法來自一個日常采用的ThermoScienti?cTSQQuantumXLSGC-MS/MS方法，沒有在TSQ™8000GC-MS/MS系統上進行進一步的優化[4]。TSQ8000系統自動優化采集窗口和采用定時SRM（t-SRM）優化儀器運行周期，以獲得大靈敏度。這避免了在操作新儀器時，通常所需的長時間手動設置（圖1）。、
圖1
【實驗/操作方法】
樣品制備
采用ThermoScienti?c Dionex ASE350 快速溶劑萃取儀的快速溶劑萃取方法，萃取草藥和茶葉樣品。在正式的農藥標準方法中說明了這個ASE方法[3]。先采用旋轉蒸發儀（Rotavap）濃縮采集的萃取液，然后通過凝膠滲透色譜法（GPC）進一步凈化。GPC步驟使用具有乙酸乙酯/環己烷流動相的聚苯乙烯凝膠（Bio-Beads®S-X3）。在利用Rotavap完成進一步濃縮后，萃取液即可用于GC進樣，主要溶劑為乙酸乙酯。
校正和線性
采用0.004μg/mL到1.0μg/mL六個校正點執行方法的定量校正和線性檢查。該范圍代表樣品（10-2500ppb）中的0.01–2.5mg/kg分析物濃度。
對于設置校正溶液，使用了一個包含草藥產品中目標農藥化合物的儲存溶液。在標準基質中制備校正溶液，基質負載量相當于使用的典型草藥萃取液。標準基質空白包括采用標準程序萃取的檸檬皮。在應用某個空白標準基質之前要測試農藥空白水平。將檸檬皮萃取液溶解在1:1的乙酸乙酯中制備標準溶液。方法校正中所有化合物的相關系數R2超過0.99（圖2）。
圖2氟氯氰菊酯的校正曲線，R2=0.9996
【實驗結果/結論】
靈敏度（LOD）
使用農藥標樣評估了檸檬皮標樣中的方法檢測限。使用4ppb(pg/μL)的基質標樣水平，S/N值用來評估檢測限（LOD）
。表1給出基質中的S/N值，受到洗脫基質影響大的保留時間處選取了重要化合物。盡管這些化合物在色譜圖中基質影響的區域洗脫，而圖3和圖4證實了對于強度大的基質與低水平的目標農藥化合物，TSQ8000GC-MS/MS系統具有的高靈敏度。
表1基質中所選農藥化合物的檢測限S/N
圖3：4ppb特草定的SRM峰（左側，161.1>88.0，CE15V）和草不綠（右側，188.1>130.1，CE25V）。SRM離子對取自PesticideMethodReference,2nded.2011。[4]
圖4：4ppb對甲抑菌靈的SRM峰（左側，238.1>137.1，CE15V）和噠螨酮（右側，309.1>147.1，CE15V）。SRM離子對取自PesticideMethodReference,2nded.2011。[4]
耐用性和維護
采用日常標準運行步驟執行GC的日常預防性維護。通過日常分析超過500個基質樣品，使基質持續載入系統，采集了圖3和圖4中的校正色譜圖。
耐用性水平意味著即使持續性載入基質，也沒有必要短期內清潔可拆卸的離子源。
TRACE1310GC在這里用作質譜儀的前端，其進樣口和檢測器的創新型即時連接模塊，使用戶可以快速進入任何進樣口部件進行快速清潔。此外，其數分鐘內更換整個進樣口模塊的*能力，既可以保持GC-MS/MS系統正常運行，又可以延長日常維護周期。
分析精度
在常規系列的50個商業樣品中，采用重復進樣測量了質量控制樣品。表2給出一系列化合物的結果。可以觀察到對于已知的不確定農藥化合物的相對影響，同時不受影響的化合物在這個長系列的基質進樣情況下，其變異系數（CV%）始終保持低于10%。
表2：檸檬皮基質加標的一系列60種農藥的QC樣品的變異系數（平均7.4%，24次進樣）
真實樣品的結果
上述方法用于分析一系列藥草、茶葉和干水果，這些樣品由于基質效應嚴重，控制它們的大農殘水平是具挑戰性的分析任務之一。表3給出不同樣品的陽性結果，以及找到的農藥化合物和濃度。利用至少兩個SRM譜圖檢測所有化合物，然后通過檢查校正離子比進行確認。濃度范圍從接近MRL水平的10mg/kg到高于法規高水平50倍的高濃度。圖5給出一個百里香樣品中已確認農殘檢測的示例。
表3：不同基質樣品中找到的高于MRL水平的陽性結果
圖5：青蘋果中腈菌唑的陽性結果（0.023mg/kg，左圖）和百里香中的啶氧菌酯（0.228mg/kg，右圖），均在兩個SRM譜圖上檢測到。
數據分析和報告
采用TraceFinder定量軟件執行數據處理。TraceFinder軟件包括一個化合物數據庫，該庫具有大量農藥化合物條目，從這些條目中選擇方法所需的化合物。對于每個農藥化合物，MRM采集所需的參數和化合物識別，例如SRM離子對、保留時間和離子比以及定量信息，例如定量質量數和回收率要求，都得以保存。
從一個集成了完整分析過程的軟件平臺上進行分析序列設置、數據采集和結果處理。在圖6中，分析序列顯示在屏幕的上半部分，方法中包括的化合物在右側。所選農藥化合物的實際色譜圖顯示在下方，以供查看。
圖6：TraceFinder軟件分析視圖：
A：校正、QC和樣品運行的采集序列表
B：具有狀態標記的化合物列表
C：具有積分定量和確認峰的化合物色譜圖窗口
擴展的生產效率
分析運行的總周期時間為30分鐘，每個小時可完成2個樣品，總共分析48個樣品，包括白天的QC檢查，以控制每次運行中200多種農藥化合物。
這種擴展的生產效率是TSQ8000三重四極桿GC-MS/MS系統及其基質樣品中加強的分析物選擇性、出色的方法和系統耐用性、使用TraceFinder軟件的數據處理共同組合的結果。農藥化合物峰一般為基線分離，具有很高的信噪比，支持準確的自動面積積分，顯著減少了手動控制需求。TraceFinder軟件內的一些質量控制參數為可能需要手動積分的化合物提供了清楚的標記。自動離子比檢查在尋找陽性結果時提供了快速而可靠的確認。TraceFinder軟件出色的處理速度適用于多殘留分析以及每個樣品快速全面的報告生成。
結論
TSQ8000GC-MS/MS為日常農殘分析，即使是困難的基質樣品，也提供了高靈敏度和基質選擇性。采用*的定時SRM功能的數據采集，在單次運行中可檢測大量農藥化合物，無需犧牲單個化合物的高靈敏度。在標樣基質中執行定量校正，在用于控制法規MRL水平的濃度范圍內，分析結果顯示出良好的線性和精度。
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