【概述】
嬰幼兒遺傳性代謝病種類繁多，臨床表現常常是非特異性的，且多無明顯的神經系統定位體征，只憑臨床表現往往很難診斷。醫學檢測技術的不斷完善及提高，對嬰幼兒遺傳性代謝疾病的研究產生了很大的推動作用。氣相色譜-質譜（GC-MS）檢測技術作為化學診斷方法，首先由K-Tanaka于1966年應用于代謝性疾病的診斷，從1992年起該方法經過多次改進，目前用此方法同時篩查氨基酸、有機酸、糖代謝異常及脂肪代謝紊亂等一百多種疾病。本文采用賽默飛世爾科技氣質聯用儀建立了嬰幼兒遺傳代謝病的快速篩查方法，方法準確，敏感性高，特異性強，是篩查遺傳性代謝疾病的有效手段。
【實驗/設備條件】
色譜柱：TG-5MS（30 m×0.25 mm×0.25μm）；
柱溫：60℃（2 min），10℃/min到220℃（3 min），15℃/min到325℃（5 min）；
進樣模式：不分流進樣，不分流時間：1min，
進樣量：1 µL；
進樣口溫度：250℃；
載氣：高純氦氣（99.999%），恒流模式，1.0 mL/min；
離子源溫度：280℃，傳輸線溫度：300℃，全掃描模式檢測，掃描范圍50-550
【實驗/操作方法】
標本收集：采用干燥潔凈的容器采集研究對象的新鮮尿液，本院樣本直接分裝到EP管，-20℃保存；外院樣本在浸透尿液收集濾紙片后，于干燥避光處陰干，密封后郵遞（耗時3-5天），寄到實驗室后-20℃保存。
尿素酶預處理：取100µL尿液或尿濾紙片提取液，加入30µL尿素酶，37℃孵育30min。
上樣前處理將標準品溶液或經過尿素酶處理的尿液樣本，加入內標十七烷酸（200ppm）及無水乙醇1000µL，充分混勻，13000rpm高速離心5min，將上清液移入色譜進樣瓶，高純氮氣吹干，殘余物加入100µL BSTFA+TMCS（99 : 1），90℃孵育40 min，進行*基硅烷化衍生化處理。待GC-MS分析。
【實驗結果/結論】
按上述條件對尿液樣品進行前處理和氣質聯用儀分析，檢測的化合物見表1。以各化合物的峰面積與肌酐的峰面積比值為判斷依據，超出正常值則視為異常。
表1.檢測的所有化合物的名稱、保留時間
利用氣相色譜-質譜法對遺傳性代謝?。↖MD）高危兒進行尿液化學分析，結果411例IMD高危兒中檢測出代謝異常269例（65.5%），其中確診IMD19例（4.6%），包括甲基丙二酸血癥15例；丙酸血癥、高苯丙氨酸血癥、尿素循環異常和焦谷氨酸尿癥各1例；疑似IMD22例（5.4%），包括乳酸血癥13例原發性甘油尿癥5例，脂肪酸代謝異常4例，Citrin缺陷癥、絡氨酸血癥、半乳糖血癥、3-甲基巴豆酰輔酶A羧化酶缺乏癥、楓糖尿癥各1例；其他代謝異常228例蔗糖、乳糖、半乳糖、N-乙酰絡氨酸、琥珀酸、雙羧酸（55.5%），表現為尿乳酸、蔗糖、乳糖、半乳糖、N-乙酰絡氨酸、琥珀酸、雙羧酸水平增高以及絲氨酸/蘇氨酸比例異常等。
圖1為實際樣品的檢測全掃描的總離子流圖。
圖1.尿液檢測結果總離子流圖（上圖為正常情況的尿液，下圖為甲基丙二酸（9.28min）血癥患兒尿液的檢測譜圖）
Tracefinder軟件可以方便的給出目標物與肌酐的峰面積比值，如圖2所示。每個化合物與肌酐的峰面積比值（response ratio）列在計算結果中。該軟件還可以同時對化合物進行定性確認，如圖3所示，目標物的定量離子和定性離子的提取離子譜圖分別列出，離子豐度比也都顯示在圖上。樣品中目標物的全掃描譜圖與參考物的全掃描譜圖對比顯示在右下方，可幫助我們對目標物進一步定性確認。
圖2. Tracefinder軟件計算結果
圖3. Tracefinder軟件定性結果瀏覽
結論
利用賽默飛世爾科技全新一代氣相色譜質譜聯用儀進行小兒遺傳代謝病的篩查*可行。尿液經尿素酶處理后，衍生用氣質聯用儀分析，Tracefinder軟件可以直接給出需要的比值結果，操作簡單方便。該方法用于411例IMD高危兒尿液篩查，篩查結果檢測出代謝異常269例。該方法準確，敏感性高，特異性強，是篩查遺傳性代謝疾病的有效手段。
【儀器/耗材清單】
儀器
ThermoScientificTMISQ單四極桿氣質聯用儀，包括：
-TRACE 1310氣相色譜，配分流不分流進樣口
-ISQ LT單四極桿質譜
- AS1310自動進樣器
Thermo ScientificTMTraceFinder 3.1數據處理系統
恒溫干燥箱、離心機、天平、漩渦混合器、氮吹儀（ThermoScientific）
耗材
色譜柱：TG-5MS（30 m×0.25 mm×0.25μm）（Thermo Scientific, PN 26098-1420）（Thermo Scientific）
試劑與標準品
乙醇：色譜純；
衍生試劑BSTFA+TMCS(99 : 1)
尿素酶
十七烷酸
【參考文獻】
[1]彭薇,張萬巧,封志純.氣相色譜-質譜法檢測遺傳代謝性疾病高?；純?臨床兒科雜志2014 (09)
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